方法名稱：復(fù)方丹參滴丸—丹參素和原兒茶醛的測(cè)定—高效液相色譜法

應(yīng)用范圍：該方法采用高效液相色譜法測(cè)定復(fù)方丹參滴丸中丹參素和原兒茶醛的含量。

該方法適用于中藥制劑復(fù)方丹參滴丸。

方法原理：供試品加1%醋酸溶液進(jìn)行超聲，放冷，濾過，取續(xù)濾液進(jìn)入高效液相色譜儀進(jìn)行色譜分離，用紫外吸收檢測(cè)器，于波長(zhǎng)279nm處檢測(cè)丹參素和原兒茶醛的吸收值，計(jì)算出其含量。

試劑：1. 甲醇（色譜純）

2. 醋酸

3. 對(duì)羥基苯甲酸

儀器設(shè)備：1. 儀器

1.1 高效液相色譜儀

1.2 色譜柱

Nucleosil C18色譜柱（250×4.6mm，10μm）。

1.3 紫外吸收檢測(cè)器

2. 色譜條件

2.1 流動(dòng)相：甲醇 水 冰醋酸 = 19 80 1

2.2 檢測(cè)波長(zhǎng)：279nm

2.3 柱溫：室溫

試樣制備：1. 稱取供試品

精密稱取該品樣品0.125g。

2. 內(nèi)標(biāo)溶液的制備

精密稱取對(duì)羥基苯甲酸10.0mg置于100mL量瓶中，加1%醋酸溶液稀釋至刻度，作為內(nèi)標(biāo)溶液。

3. 對(duì)照品溶液的制備

精密稱取丹參素對(duì)照品20.0mg和原兒茶醛對(duì)照品4.0mg，置于200mL量瓶中，加1%醋酸溶液稀釋至刻度，作為對(duì)照品儲(chǔ)備液。

4. 標(biāo)準(zhǔn)溶液的制備

精密量取上述對(duì)照品儲(chǔ)備液1.0，2.0，3.0，4.0，6.0，8.0mL置于10mL量瓶中，各精密加入內(nèi)標(biāo)溶液1.0mL，用1%醋酸溶液稀釋至刻度，作為繪制標(biāo)準(zhǔn)曲線的系列濃度標(biāo)準(zhǔn)溶液。

5.供試品溶液的制備

將供試品置于25mL量瓶中，加入內(nèi)標(biāo)溶液2.5mL，加入1%醋酸溶液超聲處理使其溶解后，放至室溫并用1%醋酸溶液稀釋至刻度，樣品溶液用0.45μm濾膜過濾，棄去初濾液，取續(xù)濾液作為供試品溶液。

注：“精密稱取”系指稱取重量應(yīng)準(zhǔn)確至所取重量的千分之一。“精密量取”系指量取體積的準(zhǔn)確度應(yīng)符合國(guó)家標(biāo)準(zhǔn)中對(duì)該體積移液管的精度要求。

操作步驟：1. 標(biāo)準(zhǔn)曲線繪制

精密吸取標(biāo)準(zhǔn)溶液10μL注入高效液相色譜儀，用紫外吸收檢測(cè)器，于波長(zhǎng)279nm處測(cè)定丹參素和原兒茶醛的吸收值，以標(biāo)準(zhǔn)溶液濃度對(duì)供試品與內(nèi)標(biāo)峰的峰面積比值繪制標(biāo)準(zhǔn)曲線，進(jìn)行線性回歸，得到回歸方程。

2. 供試品的測(cè)定

精密吸取供試品溶液10μL注入高效液相色譜儀，用紫外吸收檢測(cè)器，于波長(zhǎng)279nm處測(cè)定丹參素和原兒茶醛的吸收值，計(jì)算出其含量。