方法名稱：六味地黃丸-沒食子酸測(cè)定-高效毛細(xì)管電泳法

應(yīng)用范圍：該方法采用高效毛細(xì)管電泳法測(cè)定六味地黃丸中沒食子酸的含量。

該方法適用于中成藥六味地黃丸。

方法原理：供試品粉碎后，加95%乙醇浸泡，加熱回流提取，過濾，用高效毛細(xì)管電泳儀進(jìn)行色譜分離，用紫外吸收檢測(cè)器，于波長(zhǎng)271nm處檢測(cè)沒食子酸的吸收值，計(jì)算其含量。

試劑：1. 硼砂

2. 95%乙醇

3. 沒食子酸對(duì)照品（中國(guó)藥品生物制品檢定所）

4. 肉桂酸對(duì)照品（中國(guó)藥品生物制品檢定所）

儀器設(shè)備：1 儀器

1.1 高效毛細(xì)管電泳儀

1.2 色譜柱

未涂層熔硅彈性石英毛細(xì)管內(nèi)徑75μm；，柱長(zhǎng)60cm，有效柱長(zhǎng)45cm。

1.3紫外吸收檢測(cè)器

2 色譜條件

2.1緩沖鹽：20mmol/L硼酸鹽

2.2檢測(cè)波長(zhǎng)：271nm

2.3 重力進(jìn)樣（10cm×5S）

2.4運(yùn)行電壓：20KV

2.5 電泳溫度：20℃

試樣制備：1. 對(duì)照品溶液的制備

精密稱取沒食子酸對(duì)照品19.5mg于25mL量瓶中，用95%乙醇溶解并稀釋至刻度，作為對(duì)照品溶液。精密吸取沒食子酸對(duì)照品溶液0.1、0.2、0.4、0.8、1.0、2.0ml于5ml量瓶中，各加入肉桂酸內(nèi)標(biāo)液1ml，95%乙醇溶液定容至刻度。

2. 內(nèi)標(biāo)溶液的制備

稱取肉桂酸對(duì)照品9.6mg，用95%乙醇溶解并稀釋至25mL，作為內(nèi)標(biāo)溶液。

3. 供試品溶液的制備

取六味地黃丸粉碎后，稱取粉末5g，加95%乙醇50mL，浸泡12h,100℃加熱回流提取2h，過濾，濾渣重復(fù)提取2次，合并提取液，減壓濃縮至10mL，取該溶液2mL，加入內(nèi)標(biāo)溶液1mL,95%乙醇稀釋至5mL，作為供試品。

操作步驟：1. 標(biāo)準(zhǔn)曲線的建立

依法進(jìn)樣測(cè)定，，以沒食子酸對(duì)照品峰面積與內(nèi)標(biāo)峰面積的比值對(duì)其濃度繪制標(biāo)準(zhǔn)曲線，計(jì)算線性回歸方程。得Y=-0.016X 0.1333，r=0.9993；線性范圍為15.6～312mg/L。

2. 樣品測(cè)定

取供試品溶液，依法進(jìn)樣測(cè)量，記錄各組份峰面積值，計(jì)算沒食子酸的含量。

注：“精密稱取”系指稱取重量應(yīng)準(zhǔn)確至所稱取重量的千分之一。“精密量取”系指量取體積的準(zhǔn)確度應(yīng)符合國(guó)家標(biāo)準(zhǔn)中對(duì)該體積移液管的精度要求。