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阿魏酸試驗(yàn)研究

試驗(yàn)中,阿魏酸在濃度為50~500 μmol/L之間對(duì)DNA都有保護(hù)作用,雖然各濃度組之間差異沒(méi)有顯著性,但是尾距有隨阿魏酸濃度增加而減小的趨勢(shì)。阿魏酸存在于眾多的中草藥中,如:當(dāng)歸、川芎、丹參、鼠尾草、咖啡豆等,眾多研究顯示它對(duì)預(yù)防和治療心血管疾病十分有效。以往雖然有不少關(guān)于阿魏酸的抗氧化活性的報(bào)道,但是本實(shí)驗(yàn)時(shí)第一次使用彗星電泳法研究在細(xì)胞水平阿魏酸對(duì)DNA的保護(hù)作用,從本實(shí)驗(yàn)中可以看出阿魏酸有較強(qiáng)的抗氧化保護(hù)DNA的作用。阿魏酸之所以有較強(qiáng)的抗氧化活性,是多種機(jī)制共同作用的結(jié)果。阿魏酸的自由基清除能力與其分子結(jié)構(gòu)密切相關(guān),自由基與阿魏酸相撞后,很容易從其上面奪取一個(gè)氫原子而形成苯氧自由基,由于未配對(duì)電子不僅可以存在于氧原子上,還可以存在于整個(gè)分子的任何部位,同時(shí)借助-OCH3可以形成p型弧對(duì)電子,因而阿魏酸形成的苯氧自由基相對(duì)穩(wěn)定,而且當(dāng)兩個(gè)苯氧自由基相撞時(shí),可以結(jié)合形成姜黃素,從而減慢和終止自由基鏈?zhǔn)椒磻?yīng)的進(jìn)程。有實(shí)驗(yàn)顯示將p-香豆酸甲氧基化形成阿魏酸在一定程度上降低了苯氧自由基的穩(wěn)定性,因而抗氧化能力也有所降低。乙酰化阿魏酸可以明顯降低它的抗氧化能力,這些都證明了它是通過(guò)形成穩(wěn)定的苯氧自由基從而終止自由基鏈?zhǔn)椒磻?yīng)來(lái)實(shí)現(xiàn)抗氧化的。然而阿魏酸具有-CH=CHCOOH基團(tuán),具有吸電子作用,本不利于苯氧自由基的穩(wěn)定,但考慮到阿魏酸在溶液中顯酸性,因此一部分將以負(fù)離子形式存在,而-CH=CHCOO-具有強(qiáng)推電子性質(zhì),使其抗氧化活性增強(qiáng)。

實(shí)驗(yàn)顯示各種濃度組的阿司匹林和水楊酸對(duì)DNA都有保護(hù)作用,各濃度組濃度與陽(yáng)性對(duì)照之間都存在顯著差異,當(dāng)濃度為500 μmol/L時(shí)其尾距較低濃度組有所增加,但差異無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義??赡芘c較高濃度時(shí),它們產(chǎn)生較多的活性氧有關(guān)。這種效果與咖啡酸有些相似,可能產(chǎn)生的H2O2較少,所以損傷效果沒(méi)有那么明顯。實(shí)驗(yàn)接著采取只用阿司匹林和水楊酸對(duì)細(xì)胞進(jìn)行預(yù)處理,而不用H2O2作用的方法,彗星電泳后發(fā)現(xiàn)彗星尾距與陰性對(duì)照組相比沒(méi)有顯著變化。由于這是第一次利用彗星電泳法在細(xì)胞水平研究阿司匹林和水楊酸抗氧化保護(hù)DNA的作用,而且也沒(méi)有關(guān)于它們產(chǎn)生H2O2、的研究,所以其在高濃度時(shí)彗星尾距較低濃度組略有增加的具體機(jī)制還需要進(jìn)一步研究。實(shí)驗(yàn)顯示阿司匹林和水楊酸具有較強(qiáng)的抗氧化保護(hù)DNA的作用,長(zhǎng)期以來(lái)二者一直作為消炎止痛藥而廣泛應(yīng)用于臨床,進(jìn)來(lái)的研究主要集中于它們的抗氧化特性。據(jù)報(bào)道長(zhǎng)時(shí)間的使用阿司匹林可以防止結(jié)腸癌和其他消化道腫瘤包括食管癌胃癌。已證明阿司匹林和水楊酸具有清除·OH自由基的作用,濃度為0.5~2 mmol/L的阿司匹林可以阻止H2O2、Cu2+和HQ、Cu2+誘導(dǎo)的DNA損傷,而對(duì)于H2O2 沒(méi)有清除作用。但是Qiao等[11]用彗星電泳法證明阿司匹林誘導(dǎo)HT-29細(xì)胞系凋亡時(shí)發(fā)現(xiàn):用 3 mmol/L阿司匹林作用72 h后,可以導(dǎo)致DNA的明顯斷裂損傷,此實(shí)驗(yàn)結(jié)果可能與本實(shí)驗(yàn)中阿司匹林和水楊酸高濃度組彗星尾距較低濃度組有所增加相關(guān)。

關(guān)于香草酸的研究非常少,但是其在結(jié)構(gòu)上與阿魏酸與咖啡酸在結(jié)構(gòu)上極其相似,而且它們?nèi)咧g又可以作為彼此的代謝物而存在于體內(nèi)。本實(shí)驗(yàn)發(fā)現(xiàn)香草酸對(duì)DNA亦有保護(hù)作用,而且也有隨劑量增加而加強(qiáng)的趨勢(shì),雖然統(tǒng)計(jì)學(xué)上各濃度組之間差異無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。從結(jié)構(gòu)上來(lái)看,香草酸和阿魏酸與咖啡酸的不同之處,主要在于咖啡酸在鄰位存在一個(gè)-OH,僅能抑制超氧陰離子所致的脂質(zhì)過(guò)氧化,而前兩者在鄰位存在一個(gè)-OCH3,這可能是咖啡酸與前兩者效果不同的主要原因。從彗星尾距上來(lái)看,阿魏酸較香草酸的DNA保護(hù)效果稍微有差別,這是其在對(duì)位存在-CH=CHCOOH的結(jié)果,說(shuō)明對(duì)位的-CH=CHCOOH較-COOH可以更有效的增強(qiáng)苯氧自由基的穩(wěn)定性。

綜上,上述5種酚類(lèi)物質(zhì)均表現(xiàn)出了一定的保護(hù)DNA抗氧化活性,其中以咖啡酸保護(hù)DNA的作用最弱,可能與其鄰位的酚-OH以及產(chǎn)生較多的H2O2相關(guān),而且咖啡酸單獨(dú)與細(xì)胞作用時(shí),可以產(chǎn)生DNA斷裂損傷,阿司匹林和水楊酸在高濃度組其尾距較低濃度組又有所回升,雖然其具體機(jī)制尚未完全明確,但也可能與產(chǎn)生H2O2相關(guān),而且信號(hào)傳導(dǎo)通路以及基因調(diào)控也可能參與到其中,阿魏酸和香草酸的效果較好,可能與其鄰位的-OCH3相關(guān)。

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