在臨床上，測定血清或其他組織中一些酶的水平對很多疾病的診斷、預(yù)防及判定病情的進展具有重要意義。酶的測定可利用生化學(xué)的方法測定酶的催化活性和將酶作為蛋白用免疫方法測定酶的質(zhì)量。測定酶的催化活性是最為常用方法，它具有迅速、靈敏、成本低等特點。是目前臨床上測定酶水平廣泛使用的常規(guī)方法。但這種方法也存在著不足，作者擬就臨床酶學(xué)測定中存在的問題及目前國際上解決問題的途徑結(jié)合我們的一些調(diào)查結(jié)果做一闡述。

　　一、 測定酶催化活性存在的問題

　　測定酶的催化活性雖然是臨床上最常用的方法，醫(yī)學(xué)教|育網(wǎng)|收集整理但由于酶的催化活性不僅決定于酶的含量，還受多種因素的影響，如所用底物的性質(zhì)及濃度、反應(yīng)介質(zhì)的PH、溫度、離子強度、激活或抑制因子等，因此具有方法依賴性。這是測定酶的催化活性存在的主要問題所在。因此對同一酶項目存在多種參考范圍，各實驗室間的結(jié)果缺乏可比性，室間質(zhì)評用樣本的靶值難以確定，甚至有時會引起臨床上的誤診。國內(nèi)各臨床實驗室間測定，酶活性結(jié)果的差異較大，明顯高于一般項目的測定結(jié)果。

　　二、 解決酶活性測定方法依賴性的途徑

　　對酶活性測定進行標準化是解決這一問題的最好方法。早在20余年前國際上就開始了這方面的工作。當時提出的標準化途徑推薦使用統(tǒng)一的測定方法，一些學(xué)術(shù)團體推出了臨床常用酶催化活性測定的推薦方法和參考方法。如國際臨床化學(xué)聯(lián)合會（IFCC）酶專家組已經(jīng)完成了r-谷氨?；D(zhuǎn)移酶（GGT）（1983年）、堿性磷酸酶（ALP）（1983年）、丙氨酸氨基轉(zhuǎn)移酶（ALT）（1986年）、天冬氨酸氨基轉(zhuǎn)移酶（AST）（1986年）、肌酸激酶（CK）（1991年）、乳酸脫氫酶（LD）（1994年）及a-淀粉酶（a-AMS）（1998年）等的推薦方法。經(jīng)過多年的努力，成功地提高了酶測定的質(zhì)量和可比性。但效果仍不能令人滿意，還存在一些較嚴重的問題：第一，很多學(xué)術(shù)團體提出的推薦方法，即使原理相同，但試劑配方（緩沖液、底物、添加劑等）、反應(yīng)溫度等也可能不同，因此不同推薦方法間缺乏一致性；第二，推薦方法無法跟上分析方法和分析技術(shù)上的進步；第三，它不適應(yīng)自動化分析儀器。

　　最近國際上提出了酶活性的測定標準化新途徑，就是使用公認的酶校準物使不同的常規(guī)方法的測定結(jié)果得到統(tǒng)一。目前這項研究已取得了一定的進展。IFCC臨床酶學(xué)校準物工作組（IFCCWG-CCE）于1997年8月和1998年3月分別在瑞士和西班牙召開了工作組會議，作者作為工作組成員出席了會議并參與了有關(guān)文件的制定，部分內(nèi)容作為IFCC的文件將會很快發(fā)表。

　　三、 酶校準物的使用方法

　　使用酶校準物的方法就是用公認的酶校準物使一種或多種常規(guī)方法測定的結(jié)果與標準方法相同，也就是通過酶校準物將不同方法得出的結(jié)果的數(shù)值按標準物測定值所選定上午標準方法來表達。它是利用標準物作為載體，使測定結(jié)果的數(shù)值在標準方法和常規(guī)方法間傳遞。這樣的話，使用標準的校準物，就有可能統(tǒng)一測定結(jié)果。

　　法國的Ferard教授（IFCC WG-CCE主席）幾年前就組織了5個法國實驗室對各實驗室常規(guī)患者血清樣本中的a-AMS、ALP、GGT等3種酶活性分別在校準前后進行了測定。每種酶有兩個實驗室參加研究，均使用相同的試劑盒在自動生化分析儀上進行測定。各實驗室均使用統(tǒng)一的校準物即由歐洲標準局（BCR）提供的酶活性有證參考物（CRM318、CRM319、CRM371）進行校準。通過使用統(tǒng)一的酶校準物進行校準后，可使在不同溫度下（30℃、37℃）、使用不同緩沖液（ALP測定）、不同底物（a-AMS、GGT測定）或不同底物濃度（GGT測定）的試劑盒測定結(jié)果相對集中。

　　衛(wèi)生部臨床檢驗中心與日立公司和寶靈曼公司合作，1997年在部分日立自動生化分析儀用戶中進行了使用統(tǒng)一校準物進行校準前后測定質(zhì)控血清結(jié)果的調(diào)查。被調(diào)查的實驗室為部分日立7170、7150、7060、7250自動生化分析儀用戶。要求被調(diào)查實驗室在使用由寶靈曼公司統(tǒng)一發(fā)放的校準物（c.f.a.s）進行校準前后分別測定統(tǒng)一發(fā)放的兩個濃度的質(zhì)控血清。被調(diào)查的用戶使用的試劑盒為各自常規(guī)使用的普通試劑盒，多數(shù)為國產(chǎn)品。試驗結(jié)果表明校準后測定結(jié)果的分布明顯較標準化準前集中，并較校準前更接近質(zhì)控血清的靶值，表明使用統(tǒng)一的校準品可使使用不同試劑測定酶活性的結(jié)果相對統(tǒng)一，增加了不同實驗室間結(jié)果的可比性。但有一些實驗室經(jīng)校準后其測定結(jié)果仍很不滿意，這可能是這些實驗室所采用的測定方法的特異性與校準物定值所用方法不同（此次調(diào)查對各實驗室使用的測定方法沒有做出規(guī)定），另外也不能完全排除質(zhì)控血清基質(zhì)效應(yīng)的影響。

　　要想通過這一途徑得到一致的酶活性測定結(jié)果，有2個條件必須滿足：第一是測定方法原理一致以保證擬要進行標準的常規(guī)方法與參考方法的特異性盡可能相同。目前常用的證明的方法是用參考方法和常規(guī)方法同時測定患者樣本（50例以上、較寬分布范圍），觀察兩方法間的相關(guān)情況。第二個條件是酶校準物的可轉(zhuǎn)換性（Commutability）。所用的酶校準物必須在標準方法與擬校準的常規(guī)方法中具有相同的特性。也就是說校準物的基質(zhì)效應(yīng)應(yīng)很小。

　　四、 公認酶校準物的來源

　　有關(guān)公認的酶校準物的來源，目前已有幾個國家和國際組織發(fā)表了測定酶催化活性的參考方法。BCR和美國國家標準技術(shù)研究院（NIST）已經(jīng)研制出了某些酶的一級標準物（有證參考物，certified referense material，CRM或standard reference material，SRM），其特點是這些標準物質(zhì)的值可溯源到表示該特性值單位的準確復(fù)現(xiàn)物上，每個經(jīng)過驗證的值都附有規(guī)定置信水平的不確定度。表4為BCR推出的部分人血清基質(zhì)酶催化活性的有證參考物（CRM），這些標準物的值均是采用IFCC推薦方法確定的活性。目前IFCC推薦方法的反應(yīng)溫度均為30℃，與唱歌歸方法中常用的37℃間存在如何轉(zhuǎn)換的問題。但在1998年3月西班牙會議上，IFCC已經(jīng)決定在近期內(nèi)把所有IFCC測定酶活性的推薦方法的溫度修改成37℃，將使這一困擾我們多年的問題得到解決。