方法名稱： 烏靈膠囊—多糖的測(cè)定—分光光度法

應(yīng)用范圍： 本方法采用分光光度法測(cè)定烏靈膠囊中多糖（以葡萄糖計(jì)算）的含量。

本方法適用于中成藥烏靈膠囊。

方法原理： 供試品經(jīng)0.1%十二烷基磺酸鈉溶液加熱回流，提取液用乙醇沉淀后，離心，將水溶液制成供試液，與苯酚及硫酸反應(yīng)后置于分光光度計(jì)，于波長(zhǎng)490nm處測(cè)定吸收度，按無水葡萄糖計(jì)算其含量。

試劑： 1. 乙醇

2. 苯酚

3. 0.1%十二烷基磺酸鈉溶液

儀器設(shè)備： 可見分光光度計(jì)

試樣制備： 1. 對(duì)照品溶液的制備

精密稱取無水葡萄糖對(duì)照品，加水制成每1mL含無水葡萄糖0.1mg的溶液。

2. 供試品溶液的制備

取裝量差異項(xiàng)下的本品內(nèi)容物，研細(xì)，取1g，精密稱定，置圓底燒瓶中，精密加入0.1%十二烷基磺酸鈉溶液30mL，精密稱定，加熱回流2小時(shí)，立即冷卻，再稱定重量，以水補(bǔ)足減失的重量，搖勻，立即離心（每分鐘3500轉(zhuǎn)），精密量取上清液10 mL，加乙醇30 mL ，搖勻，冷藏24小時(shí)，離心，棄去上清液，沉淀用少量乙醇洗滌，棄去洗滌液，加水適量使溶解，轉(zhuǎn)移至100mL量瓶中，加水至刻度，混勻，作為供試品溶液。

注：“精密稱取”系指稱取重量應(yīng)準(zhǔn)確至所稱取重量的千分之一。“精密量取”系指量取體積的準(zhǔn)確度應(yīng)符合國(guó)家標(biāo)準(zhǔn)中對(duì)該體積移液管的精度要求。

注：“水分測(cè)定”用烘干法。取供試品2-5g，平鋪于干燥至恒重的扁形稱量瓶中，厚度不超過5mm，疏松樣品不超過10mm，精密稱定，打開瓶蓋在100-105℃干燥5小時(shí)，將瓶蓋蓋好，移至干燥器中，冷卻30分鐘，精密稱定重量，再在上述溫度干燥1小時(shí)，冷卻，稱重，至連續(xù)兩次稱重的差異不超過5mg為止。根據(jù)減失的重量，計(jì)算供試品中含有水分的百分?jǐn)?shù)。

操作步驟： 1. 標(biāo)準(zhǔn)曲線的繪制

精密量取對(duì)照品溶液0.2mL、0.4mL、0.6mL、0.8mL、1.0mL，分別置試管中，加水至2 mL，再加6%苯酚溶液1 mL，混勻，迅速加入硫酸5mL，搖勻，置沸水浴中加熱15分鐘，立即冷卻，以相應(yīng)試劑為空白，在490nm波長(zhǎng)處測(cè)定吸收度，以吸收度為縱坐標(biāo)，濃度為橫坐標(biāo)，繪制標(biāo)準(zhǔn)曲線。

2.供試品的測(cè)定

精密量取上述供試品溶液5mL，置50 mL量瓶中，加水至刻度，搖勻，精密量取2mL, 置試管中，照標(biāo)準(zhǔn)曲線的制定項(xiàng)下的方法，自“加6%苯酚溶液1mL”起，依法測(cè)定吸收度。

參考文獻(xiàn)： 中華人民共和國(guó)藥典，國(guó)家藥典委員會(huì)編，化學(xué)工業(yè)出版社，2005年版，一部，p.397。