方法名稱： 三妙丸－掌葉防己堿含量的測定－高效液相色譜法

應(yīng)用范圍： 本方法采用HPLC法測定三妙丸中小檗堿的含量。

本方法適用于二妙丸、三妙丸、四妙丸等成藥。

方法原理： 將原藥中的有效成分提取后，所得溶液采用毛細(xì)管GC法進(jìn)行測定，所得圖譜與對照品圖譜進(jìn)行對比分析，記錄其響應(yīng)值，采用標(biāo)準(zhǔn)曲線法計(jì)算三妙丸中掌葉防己堿的含量。

試劑： 1. 甲醇（分析純）

2. 鹽酸掌葉防己堿對照品（中國藥科大學(xué)）

儀器設(shè)備： 1 儀器

1.1 高效液相色譜儀－Waters510泵（Waters公司）

Nova－PakC18柱（4μm，3.9mm×15mm）

1.2 Waters U6K進(jìn)樣器

1.3 Shimadzu Libror AEL－40SM精密（十萬分之一）天平

2色譜條件

2.1流動相：乙腈－水=1：1（1000mL含磷酸二氫鉀3.4g及十二烷基硫酸鈉1.7g）

2.2檢測波長：345nm

2.3柱溫：室溫

2.4 流量：0.9mL/min

試樣制備： 1 供試品的制備

取成藥適量，精密稱重，置10mL具塞離心管內(nèi)，加5mL甲醇超聲提取15min，離心（3000r/min）5min，傾取上清液，過濾。重復(fù)操作3次，合并濾液，濾紙及殘?jiān)眉状记逑?，過濾，并入上清液，定容至25mL，用微孔濾膜過濾，棄去初濾液，取續(xù)濾液作為供試品溶液，待用。

2 對照品溶液的配制

精密稱取鹽酸掌葉防己堿對照品10.45mg，用甲醇定容至100mL，作為儲備液。精密量取上述儲備液1mL，甲醇定容至25mL，作為對照品溶液待用。

注：“精密稱取”系指稱取重量應(yīng)準(zhǔn)確至所取重量的千分之一。“精密量取”系指量取體積的準(zhǔn)確度應(yīng)符合國家標(biāo)準(zhǔn)中對該體積移液管的精度要求。

操作步驟： 1.標(biāo)準(zhǔn)曲線的繪制

精密吸取對照品溶液1、2、5、6、10、18、30、40μL進(jìn)樣，按前述色譜條件測定峰面積，以進(jìn)樣量X（μg）為橫坐標(biāo)、峰面積Y為縱坐標(biāo)繪制標(biāo)準(zhǔn)曲線，進(jìn)行線性回歸，得到回歸方程。

2. 供試品的測定

精密吸取上述供試品溶液5μL注入高效液相色譜儀，按前述色譜條件測定峰面積，用標(biāo)準(zhǔn)曲線法計(jì)算樣品中掌葉防己堿含量。

參考文獻(xiàn)： 潘楊,王天山，馬國祥等. HPLC法測定成藥二妙丸、三妙丸、四妙丸及知柏地黃丸中小檗堿、掌葉防己堿和藥根堿的含量.中草藥，1997，（3）：142-144.