方法名稱： 環(huán)孢素原料藥－環(huán)孢素－高效液相色譜法

應用范圍： 本方法采用高效液相色譜法測定環(huán)孢素原料藥中環(huán)孢素的含量。

本方法適用于環(huán)孢素原料藥。

方法原理： 供試品經乙腈-水（1：1）混合溶液溶解并定量稀釋，進入高效液相色譜儀進行色譜分離，用紫外吸收檢測器，于波長210nm處檢測環(huán)孢素的峰面積，計算出其含量。

試劑： 1. 乙腈

2. 叔丁基甲醚

3. 磷酸

儀器設備： 1. 儀器

1.1 高效液相色譜儀

1.2 色譜柱

十八烷基硅烷鍵合硅膠為填充劑（柱前連接¢0.25mm×1000mm的不銹鋼管），理論塔板數按環(huán)孢素峰計算應不低于1500。

1.3 紫外吸收檢測器

2. 色譜條件

2.1 流動相：乙腈 水 叔丁基甲醚 磷酸=430 520 50 1

2.2 檢測波長：210nm

2.3 柱溫：70℃

試樣制備： 1. 對照品溶液的制備

精密稱取環(huán)孢素對照品適量，用乙腈-水（1：1）混合溶液溶解并定量稀釋成每1mL中約含環(huán)孢素1.25mg的溶液，即為對照品溶液。

2. 供試品溶液的制備

精密稱取供試品適量，用乙腈-水（1：1）混合溶液溶解并定量稀釋成每1mL中約含環(huán)孢素1.25mg的溶液，即為供試品溶液。

注：“精密稱取”系指稱取重量應準確至所稱取重量的千分之一。“精密量取”系指量取體積的準確度應符合國家標準中對該體積移液管的精度要求。

操作步驟： 分別精密吸取對照品溶液和供試品溶液各20mL，注入高效液相色譜儀，用紫外吸收檢測器于波長210nm處測定環(huán)孢素（C62H111N11O12）的峰面積，計算出其含量。