1.病原體分離

　　鉤體不易著色，一般顯微鏡很難觀察到，必須采用黑底映光法直接查找鉤體。在發(fā)病10天內(nèi)可從血液及腦脊液中分離出鉤體。第二周尿中可檢出鉤體。鉤體從體液或組織中分離需要特殊的實驗室技術和培養(yǎng)基。

　　最近用超速離心集菌后直接鏡檢法、熒光抗體染色法、原血片鍍銀染色法及甲苯藍染色等方法直接檢查病原體，可達到快速診斷目的，陽性率在50%左右，有助于早期診斷。

　　動物接種是一種分離病原體的可靠方法，將患者的血液或其他體液接種于動物（幼年豚鼠和金黃地鼠）腹腔內(nèi)，晚期病例可用尿液接種于動物腹部皮下。接種3～5天，用暗視野檢查腹腔液，亦可在接種3～6天時取心血檢查。動物接種的陽性率較高，但所需時間較長，所需費用大。

　　2.血清學試驗

　　⑴凝集溶價試驗（凝溶試驗）：有較高的特異性和敏感性，但需不同型別活菌操作，凝集素一般在病后7～8天出現(xiàn)，逐漸升高，以超過1∶400效價為陽性，可持續(xù)數(shù)月到數(shù)年。間隔兩周雙份血清，效價增高4倍以上為陽性。

　?、泼嘎?lián)免疫吸附試驗（ELISA）：比凝溶試驗陽性出現(xiàn)時間更早和更靈敏。發(fā)現(xiàn)顯微鏡凝集試驗與ELISA的總符合率達86.2%.近年來國外已普遍采用鉤體IgM抗體技術，有高度特異性。

　?、情g接紅細胞凝集試驗：將從鉤體菌體中提取的一種抗原成分，將其吸附于人“O”型紅細胞表面致敏，遇到同種抗體，即發(fā)生紅細胞凝集現(xiàn)象，本試驗具鉤體感染的屬特異性而無群或型的特異性，較凝溶試驗陽性出現(xiàn)早，操作簡便，不需特殊設備，適合基層推廣應用。

　?、乳g接紅細胞溶解試驗：用鉤體抗原物質(zhì)將新鮮綿羊紅細胞致敏，在補體存在的條件下與含有抗體的血清混合時發(fā)生溶血，較間接紅細胞凝集試驗的靈敏性為高。

　?、砷g接熒光抗體法：此法是將標準鉤體菌株作成涂片，然后將檢測病人的血清滴在已知菌株的玻片上，經(jīng)洗滌，如病人血清中具有抗體，抗原抗體結合，再用抗人球蛋白熒光抗體與此復合物結合，發(fā)生熒光，即為陽性，此法無型特異法。本法檢出抗體時間及陰轉(zhuǎn)時間均較顯凝試驗抗體為早，具有一定的早期診斷意義。

　　上述各項檢測，均是用已知鉤體抗原檢測血中出現(xiàn)的相應抗體，不能做到早期診斷。近年來開展了乳膠凝集抑制試驗，反向間接血凝試驗與間接熒光抗體染色試驗等可以測出血中早期存在的鉤體，已取得了早期診斷的初步成果。

　　3.早期診斷

　?、陪^端螺旋體DNA探針技術：早已應用于臨床，schoone等1984年證實，用黃疸出血群哥本哈根型Wijnberg株DNA制備探針，可在硝酸纖維素濾膜上檢出2pg的同源DNA.且致病性鉤體不同血清群PatocⅠ株呈交義雜交現(xiàn)象。作者認為DNA探針雜交技術是一種敏感性高的早期診斷方法。

　　⑵DNA基因擴增技術：聚合酶鏈反應（PCR）的DNA擴增技術目前已引入鉤體病的診斷領域。因PCR只要有引物便可進行試驗，且方法簡便，并適用于大數(shù)量標本的流行病學調(diào)查。VanEys等1989年用PCR擴增技術對哈焦型鉤體感染的牛尿作了檢測研究，提出PCRDNA擴增技術完全可作鉤體病診斷的一個新型方法。