關于組織和細胞粗抗原的制備常用方法,醫(yī)學教育網(wǎng)小編專門整理如下,請各位檢驗主管技師考生仔細查看。
(1)反復凍融法:
將待破碎的細胞(有時為整塊組織)置-20冰箱內(nèi)凍結,然后緩慢地融化。如此反復2次,大部分組織細胞及細胞內(nèi)的顆??杀蝗谄?。
(2)冷熱交替法:
在細菌或病毒中提取蛋白質(zhì)及核酸時可用此法。操作時,將材料投入沸水浴中,90℃左右維持數(shù)分鐘,立即置于冰浴中使之迅速冷卻,絕大部分細胞被破壞。
(3)超聲破碎法:
對微生物和組織細胞多用此法。處理效果與樣品濃度和使用頻率有關。一般組織細胞皆易破碎,而細菌,尤其是真菌的厚膜孢子則較難打破。超聲波所使用的頻率從1~20kHz不等。同樣要間歇進行,因長時間超聲也會產(chǎn)熱,易導致抗原破壞。一次超聲1~2min,總時間為10~15min.
(4)自溶法:
利用組織和微生物的自身酶系,在一定的pH和溫度下,使其細胞裂解。自溶的溫度,對動物組織細胞常選0~4℃,而對微生物常選室溫。自溶時常需加入少量防腐劑,如甲苯或氯仿等,NaN3不宜使用,因其能抑制酶的活力。
(5)溶菌酶處理法:
在堿性條件下(pH8.0),溶菌酶可專一破壞細菌細胞壁,適用于多種微生物。除溶菌酶外,蝸牛酶、纖維素酶等也可用于消化細菌和組織細胞。
(6)表面活性劑處理法:
常用的有十二烷基吡啶、支氧膽酸鈉等。因效果較差,已少應用。
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