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細(xì)胞因子的檢測-公衛(wèi)助理醫(yī)師技能考試

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細(xì)胞因子的檢測是公衛(wèi)助理醫(yī)師實踐技能第三站會涉及到的知識點,醫(yī)學(xué)教育網(wǎng)搜集整理了相關(guān)資料,以便大家更好地復(fù)習(xí)。

細(xì)胞因子檢測是判斷機(jī)體免疫功能的一個重要指標(biāo),因而具有重要的實驗室研究價值,同時還可能在臨床上有諸多實用價值、包括許多疾病的診斷、病程觀察、醫(yī)|學(xué)教育網(wǎng)搜集整理療效判斷及細(xì)胞因子治療監(jiān)測等。但是,由于細(xì)胞因子在體內(nèi)的含量甚微,給細(xì)胞因子的檢測帶來困維。目前細(xì)胞因子的主要檢測方法包括:

(一)依賴性細(xì)胞株

一些腫瘤細(xì)胞株必須依賴于細(xì)胞因子方能在體外增殖,如DTLL細(xì)胞株依賴IL-2;FDC-PL細(xì)胞株依賴于小鼠IL-3;TF-1細(xì)胞株依賴于人IL-3和人GM-CSF,因而可利用這些依賴細(xì)胞株檢測相應(yīng)的細(xì)胞因子。這種方法敏感性高,特異性也不錯,但可異的是并非所有細(xì)胞因都能找到相應(yīng)的細(xì)胞株,因而限制了它的應(yīng)用。

(二)功能檢測

利用一些細(xì)胞因子的功能特性,可建立相應(yīng)的活性測定方法,如干擾素的抑制病毒感染效應(yīng),腫瘤壞死因子對L929細(xì)胞的殺傷作用等。這樣的方法敏感性高,但特異性不夠,容易受一些擾因素的影響。

(三)免疫測定

利用抗原抗體反應(yīng)的原理,制備出抗細(xì)胞因子的單克隆抗體或多克隆抗體,可進(jìn)行細(xì)胞因子的免疫檢測。這種方法的優(yōu)點是特異性強(qiáng)、操作簡便,缺點是靈敏度不夠,且不能代表活性測定的結(jié)果。從目前的國際發(fā)展趨勢來看,已研制出了高靈敏度、特異性高、高度配套的細(xì)胞檢測試劑盒,其應(yīng)用范圍正在擴(kuò)大,有良好的發(fā)展前景。

(四)功能測定與抗體抑制

為解決功能定特異性不夠,免疫測定靈敏度不夠的問題,可將兩種方法結(jié)合起來,利用各自的長處,有可能得到較為可靠的結(jié)果。在這一方法中,所用的抗細(xì)胞因子抗體必須是具有中和活性的抗體。

(五)分子雜交技術(shù)

利用分子生物學(xué)技術(shù),制備出細(xì)胞因子的基因探針,可通過分子雜交技術(shù)檢測細(xì)胞內(nèi)細(xì)胞因子mRNA的表達(dá),這是一種高度敏感和高度特異的檢測技術(shù),目前在實驗室研究中使用較廣,其缺點是操作較為繁瑣,測定結(jié)果只能代表細(xì)胞因子基因的表達(dá),而不能代表活性細(xì)胞因子的水平。

(六)多聚酶鏈反應(yīng)技術(shù)(PCR)

PCR(polymerasechain reation)技術(shù)是一種高效的基因體外擴(kuò)增技術(shù),目前PCR技術(shù)已用于細(xì)胞因子的檢測中,首先將細(xì)胞因子產(chǎn)生細(xì)胞的RNA提取出來,再經(jīng)逆轉(zhuǎn)錄合成cDNA,以cDNA為模板,在細(xì)胞因子引物的引導(dǎo)下,即可進(jìn)行PCR擴(kuò)增。這種技術(shù)是迄今最敏感的細(xì)胞因子檢測技術(shù),操作也較簡便,缺點與分子雜交技術(shù)類似,并且不容易對細(xì)胞因子表達(dá)水平進(jìn)行定量。

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