淋球菌的分離培養(yǎng)臨床檢驗(yàn)技士考試要求的考點(diǎn)，醫(yī)學(xué)教育網(wǎng)做了整理，希望對(duì)大家有幫助。

原理

如果標(biāo)本中有淋球菌，則在合適的培養(yǎng)基上經(jīng)培養(yǎng)后可長(zhǎng)成菌落。各種細(xì)菌在培養(yǎng)基上生長(zhǎng)成的菌落形態(tài)各不相同。根據(jù)菌落的大小、表面高起或扁平、光澤、色素和邊緣的情況等，作為細(xì)菌鑒定的標(biāo)準(zhǔn)。

方法

1.取材

培養(yǎng)要獲得成功，取材的部位和方法要準(zhǔn)確。由男性病人前尿道取材時(shí)，應(yīng)該用細(xì)小棉拭子或藻酸鈣拭子或白金耳伸入尿道口2cm～4cm，取出的分泌物應(yīng)略帶粘膜。從女病人的宮頸取材時(shí)，應(yīng)先用溫水濕潤(rùn)擴(kuò)陰器（不要用液體石蠟等潤(rùn)滑油）。應(yīng)將棉拭插入宮頸口1.5cm處，稍轉(zhuǎn)動(dòng)并停留10s～30s，讓棉拭充分吸附分泌物。從直腸取材時(shí)，應(yīng)將棉拭插入肛門2.5cm以上，如果棉拭碰到糞便，應(yīng)換一個(gè)棉拭重取。檢查淋菌性咽炎時(shí)，應(yīng)從扁桃體及扁桃體窩取材。為了提高陽(yáng)性率，可同時(shí)取二份標(biāo)本進(jìn)行培養(yǎng)。

2.培養(yǎng)基

由于淋球菌的營(yíng)養(yǎng)要求較復(fù)雜，所用的培養(yǎng)基中應(yīng)含有動(dòng)物蛋白及細(xì)菌生長(zhǎng)所需的各種因子。目前國(guó)內(nèi)常用的是血液瓊脂或巧克力瓊脂。為抑制雜菌，在培養(yǎng)基中可加入少量抗菌物質(zhì)如多粘菌素B（25g/ml）和萬(wàn)古霉素（3.3g/ml）等。所用血液如羊血、兔血和人血均可，濃度為8%～10%.但避免血液中加入抗凝劑等藥物。培養(yǎng)基的pH值以7.4為好。目前國(guó)外常用的培養(yǎng)基有Thayer-Martin（T-M）培養(yǎng)基、NewYork City（NYC）培養(yǎng)基和Martin-Lewis（ML）培養(yǎng)基等。T-M培養(yǎng)基是在GC基礎(chǔ)培養(yǎng)基中，加入血紅蛋白（1%）、抗生素（萬(wàn)古霉素3g/ml、粘菌素7.5g/ml和制霉菌素12.5g/ml）和淋球菌增菌劑，使絕大多數(shù)雜菌被抑制而淋球菌菌落長(zhǎng)得較大，在乎皿中幾乎呈純培養(yǎng)，從而大大提高了由子宮頸、尿道，尤其是咽和直腸部位分離出淋菌的陽(yáng)性率。

3.培養(yǎng)條件

淋球菌對(duì)外環(huán)境變化頗為敏感，對(duì)寒冷和干燥抵抗力很弱。因此，為了保證培養(yǎng)有足夠的成功率，取材后應(yīng)立即接種，標(biāo)本離體時(shí)間越短越好。取材處離實(shí)驗(yàn)室距離較遠(yuǎn)時(shí)，應(yīng)將標(biāo)本接種于Smart或Amies運(yùn)送培養(yǎng)基或1%葡萄糖肉浸液中，并注意在運(yùn)送過(guò)程中保溫。接種的血平皿應(yīng)先放在37℃溫箱中預(yù)溫。培養(yǎng)的最適溫度為35℃～36℃，超過(guò)38.5℃或低于30℃便生長(zhǎng)不良。因此，孵育的溫度要恒定。淋球菌為需氧菌，但最初從人體分離時(shí)，為促進(jìn)生長(zhǎng)，需用5%二氧化碳環(huán)境培養(yǎng)。為保持一定的濕度，可在培養(yǎng)缸中放些浸水棉球。

結(jié)果

淋球菌在血平皿上經(jīng)24h～48h的培養(yǎng)后，可形成圓形、凸起、濕潤(rùn)、光滑、半透明或灰白色菌落。邊緣呈花瓣?duì)?，直徑?.5mm～1.0mm.用白金耳觸之有粘性。如繼續(xù)培養(yǎng)，菌落面積增大，表面變得粗糙，邊緣出現(xiàn)皺縮。若從菌落上取材作涂片，可見(jiàn)到菌的大小及染色的深度有差異，排列也不一致，約有25%的菌為典型的雙球菌，其他75%為單球菌、四聯(lián)形或八疊形。

淋球菌在液體培養(yǎng)基中生長(zhǎng)于液體表面，或稍有輕度混濁和顆粒沉淀。

注意事項(xiàng)

1.培養(yǎng)要獲得成功，取材是關(guān)鍵之一。取材的深度一定要夠，因?yàn)榱芮蚓冒l(fā)于柱狀上皮細(xì)胞而不是復(fù)層鱗狀上皮細(xì)胞。男性尿道前端包括舟狀窩都為復(fù)層鱗狀上皮覆蓋，所以要深人到尿道內(nèi)2cm～4cm處，并蘸取少量粘膜，陽(yáng)性率才高。女性病人取材時(shí)，要求將棉拭插入宮頸管，轉(zhuǎn)動(dòng)并停留10s～30s也是這個(gè)道理。有些人只在陰道口取少量分泌物作分離培養(yǎng)，陽(yáng)性率當(dāng)然會(huì)降低，因?yàn)橛猩盍Φ木鷱膶m頸隨分泌物由陰道流出需一定時(shí)間，陰道內(nèi)pH值低，又因各種雜菌的作用，到陰道口時(shí)淋菌的生活力較低，再加上培養(yǎng)過(guò)程中各種因素的影響，培養(yǎng)成功的機(jī)會(huì)就會(huì)減少。

2.對(duì)癥狀不典型的男病人取材，最好是在晨起排尿前或排尿后2～3h之后。另外，采樣者應(yīng)熟練掌握前列腺按摩術(shù)，必要時(shí)作前列腺按摩取材。

3.對(duì)女性淋病的檢查主張用淋球菌培養(yǎng)。國(guó)內(nèi)目前使用血液瓊脂加入多粘菌素作抑菌劑效果尚可。但蛋白胨最好用進(jìn)口的（Oxoid公司產(chǎn)品或日本產(chǎn)或Polypepton等），并用肉浸液加酵母浸膏等為好。

4.國(guó)內(nèi)目前使用的血液瓊脂或巧克力瓊脂中加人多粘菌素和萬(wàn)古霉素以分別抑制革蘭陰性和革蘭陽(yáng)性雜菌。但由于部分淋球菌（某些地區(qū)可高達(dá)5%）對(duì)萬(wàn)古霉素也敏感，因此，最好不用萬(wàn)古霉素。

5.淋球菌在血平板上培養(yǎng)24h，雖能見(jiàn)到菌落，但個(gè)兒很小，難以辨認(rèn)其特點(diǎn)。24h～36h，菌落迅速長(zhǎng)大。所以觀看菌落特征最好在36h左右。超過(guò)36h，菌落特征也會(huì)有較大的改變。

臨床意義

淋球菌培養(yǎng)用作診斷和某些特殊目的。醫(yī)學(xué)教|育網(wǎng)|收集整理培養(yǎng)法對(duì)男性及女性標(biāo)本都是適用的，是世界衛(wèi)生組織推薦的篩查淋病病人的唯一方法，也是診斷淋病的金標(biāo)準(zhǔn)方法。

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