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副傷寒分子生物學(xué)診斷方法

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副傷寒分子生物學(xué)診斷方法:

1.DNA探針(DNAProbe)DNA探針是用DNA制備的診斷試劑,用于檢測(cè)或鑒定特定的細(xì)菌,方法是用一段已標(biāo)記的特定的DNA片段(探針)與標(biāo)本中已變性的細(xì)菌DNA雜交,通過(guò)測(cè)定是否發(fā)生雜交反應(yīng)來(lái)達(dá)到檢測(cè)目的,由于此探針是以細(xì)菌專有的特異性基因片斷制備,故特異性很高。用DNA探針對(duì)培養(yǎng)所得的傷寒桿菌進(jìn)行檢測(cè),敏感性需標(biāo)本中達(dá)1000個(gè)細(xì)菌才能檢出。DNAProbe的特異性高而敏感性低,一般用于菌種鑒定及分離。

2.聚合酶鏈反應(yīng)(PCR)PCR方法是80年代中后期發(fā)展起來(lái)的一種分子生物學(xué)方法,它能在數(shù)小時(shí)內(nèi)在體外將目標(biāo)基因或DNA片段擴(kuò)增到數(shù)百萬(wàn)倍,檢出率較DNA探針高100~10000倍,JaeHS等用PCR方法擴(kuò)增傷寒的鞭毛抗原編碼基因,敏感度能檢出10個(gè)傷寒菌,特異性為100%,PCR方法因其高度敏感,易出現(xiàn)產(chǎn)物污染,所以控制PCR方法的假陽(yáng)性及假陰性,是提高準(zhǔn)確度的關(guān)鍵。

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