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腦毒理學(xué)研究的某些進展(3)

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  研究腦毒理學(xué)的新技術(shù)

  1 形態(tài)學(xué)方法 

  在形態(tài)學(xué)方法中有束路追蹤法、化學(xué)神經(jīng)解剖法、原位雜交法、受體定位法、神經(jīng)系統(tǒng)功能活動形態(tài)定位法和形態(tài)學(xué)的觀察(分析) 法??墒褂脽晒馑厥聚櫦夹g(shù),放射性核素示蹤技術(shù),也可使用各種類型的顯微鏡等。國內(nèi)不少學(xué)者進行了探索,如赫秋月報道了丙烯酰胺,阮素云等報道了低濃度鉛對大鼠血腦屏障超微結(jié)構(gòu)的損害, 國外也有類似報道。

  2 生理學(xué)方法

  在中樞神經(jīng)系統(tǒng)中神經(jīng)聯(lián)系要通過突觸來傳遞,突觸傳遞主要方式是化學(xué)傳遞,神經(jīng)遞質(zhì)的釋放是中樞神經(jīng)系統(tǒng)功能的主要方面。目前應(yīng)用的方法有:腦內(nèi)微透析術(shù),微穿刺術(shù),腦片推挽灌流抗體微探針等技術(shù),測定神經(jīng)中樞神經(jīng)遞質(zhì)釋放量 。此外,還有行為學(xué)方法。

  3 電生理學(xué)方法

  常用的有電生理儀器,新近發(fā)展了膜片鉗、電壓鉗和誘發(fā)電位的測定。1996年發(fā)現(xiàn)LTP現(xiàn)象,目前所說的LTP是由N-甲基-D-天門冬氨酸(NMDA)受體依賴的突觸傳遞效能的持續(xù)性增強,LTP自身的協(xié)同性、聯(lián)合性、特異性等特點,使它成為信息、貯存和記憶的細胞機制。海馬是神經(jīng)系統(tǒng)參與第一級記憶的關(guān)鍵部位,它是通過新皮質(zhì)廣泛反復(fù)的聯(lián)系而起作用。

  2002年阮迪云應(yīng)用膜片鉗技術(shù)和原位雜交技術(shù)研究了鉛對鉀通道亞單位和NMDA受體亞單位的影響,低濃度鉛暴露損傷了大鼠海馬神經(jīng)元和背根神經(jīng)節(jié)鉀通道亞單位和海馬NMDA 受體亞單位的mRNA的表達。有學(xué)者報道了兒童鉛暴露對腦干聽覺誘發(fā)電位的影響,使神經(jīng)傳導(dǎo)速度減慢,從而影響了聽覺系統(tǒng)發(fā)育。

  4 生物化學(xué)方法

  人體復(fù)雜的腦功能可采用磁共振光譜觀察腦內(nèi)神經(jīng)遞質(zhì)氨基酸等生物化學(xué)變化,是一種無創(chuàng)傷性先進技術(shù)。但有時還需要通過放射免疫分析法對神經(jīng)遞質(zhì)作微量測定。還可利用放射配體測定受體法測定受體數(shù)和配體與受體的親和力,應(yīng)用免疫印跡法鑒定生物分子。此外,還有受體的放射配體結(jié)合分析法和受體mRNA的檢測法。2003年李玉紅報道了電磁輻射對大鼠海馬氨基酸類神經(jīng)遞質(zhì)水平的影響。有人報道甲基汞對腦組織有極大的親和性,在0.5mg/kg劑量下,20min即可迅速穿過血腦屏障進入腦組織,并在腦組織中逐漸積累。目前國內(nèi)開展的項目很多,有外源性化合物對腦肌酸激酶的影響,對腦組織細胞色素P450的作用,對腦金屬硫蛋白的影響以及對NO信使及各類酶的作用。生物化學(xué)法在腦毒理學(xué)的研究中十分活躍。

  5 分子生物學(xué)方法

  分子生物學(xué)方法在近20年發(fā)展非???神經(jīng)生物學(xué)研究中常用的分子生物學(xué)方法有基因的分子克隆,克隆后的基因在人工體外系統(tǒng)或細胞中表達,PCR擴增核酸分子技術(shù),原位雜交法等。我國神經(jīng)分子生物學(xué)方法近年來發(fā)展很快,2002年報道了農(nóng)藥氰戊菊酯可引起小鼠腦組織c-fos、c-jun基因快速而短暫地表達,而辛硫磷與氰戊菊酯混配后引起c-fos、c-jun基因表達時程延長。2002年報道了鉛對幼鼠海馬區(qū)BCL-2、FAS蛋白表達的影響。基因芯片用于腦衰老的研究,使腦衰老機制和治療的研究達到了前所未有的速度。

  6 腦成像技術(shù)

  腦成像技術(shù)很多有顱骨X線成像技術(shù),同位素腦掃描,計算機斷層掃描術(shù),核磁共振成像,正電子發(fā)射斷層掃描術(shù)及單光子發(fā)射計算機體層攝影等。1997年報道了慢性錳中毒顱腦CT的改變。發(fā)現(xiàn)慢性錳中毒可致腦萎縮,基底節(jié)區(qū)腔隙性腦梗死,它對錳中毒的診斷提供了新的參考依據(jù)。

  展望

  現(xiàn)今,我國腦毒理學(xué)研究正在進行,有的以“腦功能基因組學(xué)”研究為重點,以學(xué)習(xí)與記憶的功能基因組和蛋白質(zhì)組研究為主攻方向,應(yīng)用具有時間與空間特異性的可誘導(dǎo)基因敲入與敲除等現(xiàn)代遺傳工程技術(shù),以發(fā)現(xiàn)、分離和分析與學(xué)習(xí)記憶等腦的高級功能活動相關(guān)的腦基因:有的從基因、分子和神經(jīng)網(wǎng)絡(luò)等不同水平揭示哺乳動物學(xué)習(xí)和記憶等腦功能的分子和神經(jīng)機制,并在此基礎(chǔ)上進一步開展腦記憶等疾病發(fā)病機制與基因治療相關(guān)研究;也有為揭示腦衰老、瘋牛病、人克雅氏綜合征、PD和AD等的發(fā)病機制和研制治療藥物提供依據(jù)。相信我國在未來的國際腦毒理學(xué)研究中將占有重要的地位。

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