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牙齦卟啉菌內(nèi)毒素化學(xué)組成和SDS-PAGE圖譜分析

  牙齦卟啉菌脂多糖(porphyromonasgingivalislipopolysaccharide,Pg-LPS)具有內(nèi)毒素活性,但其活性較大腸桿菌LPS(E.ColiLPS,E-LPS)弱[1,2]。我們經(jīng)實驗研究證明,脂肪酸組成的差異可能是Pg-LPS毒性較低的主要原因之一。

  一、材料與方法

  1.LPS的制備:應(yīng)用酚水法、核酸酶消化和超離心法提取Pg47A-1株、E.coliO55B544336株和鉤端螺旋體Leo株的LPS(LeptospiralLPS,L-LPS)。

  2.脂肪酸和單糖的分析:LPS經(jīng)酸水解后釋放的脂肪酸和單糖分別與硫酸-甲醇、乙酸酐反應(yīng),生成甲基酯和乙酸醛醇衍生物,用OV-17和SilarFCP柱分別進(jìn)行脂肪酸和單糖的氣相色譜分析。

  3.十二烷基硫酸鈉-聚丙烯酰胺凝膠電泳(SDS-PAGE):采用垂直不連續(xù)板狀電泳系統(tǒng)和銀染色法分析各種LPS的SDS-PAGE圖譜[3]。

  二、結(jié)果與討論

  1.脂肪酸分析結(jié)果:Pg-LPS主要含羥基十五烷酸、羥基十七烷酸和羥基棕櫚酸,E-LPS主要含羥基豆蔻酸、豆蔻酸和月桂酸(表1)。LPS的毒性主要取決于其所含脂肪酸的種類。Mcintire等曾證明,若從E-LPS中去除月桂酸(12∶0)、豆蔻酸(14∶0)和羥基豆蔻酸(3-OH-14∶0)或代以奇數(shù)碳原子脂肪酸,則LPS的內(nèi)毒素活性明顯下降。故認(rèn)為脂肪酸組成的差異是導(dǎo)致Pg-LPS毒性較低的主要原因之一。

  2.單糖分析結(jié)果:Pg-LPS和E-LPS的單糖組成和含量相似,但E-LPS缺乏木糖(表2)。已有研究表明,LPS的Ⅰ型類脂A骨架為氨基葡萄雙糖,Pg-LPS和E-LPS均有較高含量的氨基葡萄糖,故可以認(rèn)為兩者均為Ⅰ型類脂A的LPS。

  

  3.SDS-PAGE圖譜:已有報道醫(yī)學(xué)教育網(wǎng)搜集整理。

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