茶的防齲作用研究表明,茶葉中的氟和鞣酸可能是其防齲作用的主要成份。從動物實驗發(fā)現(xiàn),除氟之外茶中還有其他成份具有防齲作用;綠茶中的氟與鞣酸等物質(zhì)的協(xié)同作用增強(qiáng)了防齲作用。本研究采用中國主要產(chǎn)茶區(qū)的3種茶,觀察其對經(jīng)致齲飼料喂養(yǎng)和接種變鏈菌的鼠的防齲作用,并研究防齲作用與茶中氟和鞣酸含量的關(guān)系。
材料和方法
1.茶浸液制備:將各組0.5g茶葉浸入50ml煮沸的雙蒸水中,勻速攪拌5分鐘后再放置5分鐘過濾取茶浸液。
2.氟和鞣酸濃度的測定:用TISAB緩沖液及氟離子電極測定了30種茶氟的含量。本研究選用龍井茶、烏龍茶和四川涪陵紅茶,測定了氟含量。采用Holf等的固定蛋白的方法測定鞣酸濃度。
3.動物模型:36只出生后15~17天的Spaguo-Dawby種大鼠,喂以飼料2000(日本配合飼料株式會社),加入四環(huán)素4mg/g和飲用水(每毫升加青霉素400U)。同時,每日以青霉素G0.1ml(含400U)置入口腔,抑制鼠口腔中固有菌群的生長。在大鼠生長到18~22天時,將具有鏈霉素抗性的StreptococcusSobrinus6715菌株(血清型g)懸浮于10ml消毒鹽水制備1010CFU/ml的懸浮液,連續(xù)5日,將含有100μl變鏈菌株6715的懸浮液接種在每只大鼠的磨牙牙齦部。
4.實驗分組:大鼠出生后的第18天,將36只鼠隨機(jī)分為四組,每組9只,A組為對照組,B組(龍井茶)、C組(烏龍茶)、D組(涪陵江茶)為實驗組。喂以致齲食物2000。該飼料主要成分是蔗糖,同時給與實驗茶和對照雙蒸水醫(yī)學(xué)教育 網(wǎng)搜集整理。
5.細(xì)菌計數(shù):在接種StreptococcusSobrinus6715第14、28、49天用消毒棉拭子在鼠磨牙的頰面和牙合面按統(tǒng)一的方法擦拭菌斑。將棉拭子放在1ml消毒鹽水試管中搖勻后,取懸浮液涂布于含鏈霉素(500mg/ml)的M-S培養(yǎng)平板,37℃培養(yǎng)72小時,計算平板的檢出菌落數(shù)。
6.菌斑及齲蝕程度檢測:出生77天后的大鼠被處死,取其頜骨。上頜牙用1.5%的藻紅染色,按Rogolati和Hotz方法計算牙菌斑指數(shù)。將下頜骨軟組織和溝裂部的食物殘渣去凈后,再經(jīng)超聲波清洗處理,用1.5%藻紅染色4小時,制作牙齒磨片。顯微鏡下檢測第1、2、3磨牙頰-舌面,牙合面和近中面齲蝕狀況。齲蝕程度按Keyes計算方法記錄。