摘 要:目的構建含有HIV-1核心蛋白gag基因的真核表達質粒,并研究其免疫應答反應。
方法 采用PCR方法從1例HIV感染者中擴增出gag基因,構建重組質粒pcDNA-GAG。接種小鼠后,檢測其抗體及抗體亞類,并對小鼠的淋巴細胞亞群進行分析,采用3H-TdR法、ELISPOT方法和51Cr釋放法分別檢測T淋巴細胞的增殖反應性、特異性分泌IFN-γ的CD8+T淋巴細胞以及特異性CTL殺傷活性。
結果 重組質粒體外表達目的蛋白的相對分子質量(Mr)約為55×103。免疫小鼠后可誘導產生特異性抗體,其中IgG2a與IgG的比例顯著高于IgG1與IgG的比例;T淋巴細胞體外經ConA刺激后SI達到160.67,顯著高于對照組(14.04,P<0.05);產生IFN-γ的CD8+T淋巴細胞數目以及特異殺傷率均顯著高于對照組小鼠(P<0.05)。
結論 重組質粒pcDNA-GAG可誘導小鼠產生特異性體液和細胞免疫應答反應,而且ELISPOT方法檢測特異性細胞免疫應答反應的結果與51Cr釋放法一致,提示可用此法對DNA疫苗誘導的細胞免疫進行評價。