熒光抗體技術(shù)是初級(jí)檢驗(yàn)技師考試大綱所包含的內(nèi)容，醫(yī)學(xué)教育網(wǎng)搜集整理相關(guān)內(nèi)容供大家學(xué)習(xí)參考。

　?。?）熒光抗體的制備和鑒定：

　?、倏贵w熒光素標(biāo)記：用于標(biāo)記抗體，要求是高特異性和高親和力的。作為標(biāo)記的熒光素應(yīng)符合以下要求：

　　1）應(yīng)具有能與蛋白質(zhì)分子形成共價(jià)鍵的化學(xué)基團(tuán)，與蛋白質(zhì)結(jié)合后不易解離，而未結(jié)合的色素及其降解產(chǎn)物易于清除。2）熒光效率高，與蛋白質(zhì)結(jié)合后，仍能保持較高的熒光效率。3）熒光色澤與背景組織的色澤對(duì)比鮮明。4）與蛋白質(zhì)結(jié)合后不影響蛋白質(zhì)原有的生化與免疫性質(zhì)。5）標(biāo)記方法簡單、安全無毒。6）與蛋白質(zhì)的結(jié)合穩(wěn)定，易于保存。常用的標(biāo)記蛋白質(zhì)的方法有攪拌法和透析法兩種。

　?、跓晒饪贵w的鑒定：包括效價(jià)及熒光素與蛋白質(zhì)的結(jié)合比率?？贵w效價(jià)可以用瓊脂雙擴(kuò)散法進(jìn)行滴定，效價(jià)大于1：16者較為理想。熒光素與蛋白質(zhì)結(jié)合比率（F/P）來計(jì)算。F/P值越高，說明抗體分子上結(jié)合的熒光素越多，反之則越少。一般用于固定標(biāo)本的熒光抗體以F/P=1.5為宜，用于活細(xì)胞染色的以F/P=2.4為宜。

　　（2）免疫熒光顯微技術(shù)：是使熒光抗體與標(biāo)本切片中組織或細(xì)胞表面的抗原進(jìn)行反應(yīng)，洗滌除去游離的熒光抗體后，于熒光顯微鏡下觀察，在黑暗背景上可見明亮的特異熒光。

　?、贅?biāo)本的制作：主要靠觀察切片標(biāo)本上熒光抗體的染色結(jié)果作為抗原的鑒定和定位。

　　②熒光抗體染色：滴加經(jīng)適當(dāng)稀釋的熒光抗體進(jìn)行染色。

　　③熒光顯微鏡檢查：最好在染色當(dāng)天即作鏡檢，以防熒光消退，影響結(jié)果。

　?、軐?shí)驗(yàn)的類型：包括直接法、間接法、補(bǔ)體結(jié)合法和雙標(biāo)記法。