B淋巴細(xì)胞表面標(biāo)志注意事項(xiàng)：

（1）熒光抗體試劑中存在凝聚IgG的影響，凝聚IgG可以和B細(xì)胞表面Fc受體結(jié)合出現(xiàn)假陽(yáng)性，因此，為避免出現(xiàn)凝聚IgG須注意：

①不能使用F/P克分子比值過(guò)高的熒光抗體，一般以1～3為宜。

②含低濃度蛋白的熒光抗體低溫保存不穩(wěn)定，一般不應(yīng)低于2mg/ml.

③低溫保存的熒光抗體不可反復(fù)凍融，使用前150000r/min離心30min，除去凝聚物。

（2）活的淋巴細(xì)胞作免疫熒光染色時(shí)，在全部試劑中（標(biāo)記抗體、Hank液等）均需加NaN3，以限制細(xì)胞膜的流動(dòng)性。否則會(huì)出現(xiàn)帽狀熒光和吞噬現(xiàn)象，熒光細(xì)胞實(shí)際數(shù)下降。

（3）用抗IgG熒光抗體染色時(shí)，可由于標(biāo)本中含有抗原一抗體（IgG型）免疫復(fù)合物與B細(xì)胞表面Fc受體結(jié)合，表現(xiàn)為熒光陽(yáng)性。為此，有人建議用熒光標(biāo)記抗F（ab）2抗體染色，以排除Fc受體被著染。

（4）醫(yī)學(xué)|教育網(wǎng)整理搜集如果當(dāng)天不能觀察標(biāo)本，則將細(xì)胞懸于熒光抗體保存液中，4℃存放，次日計(jì)數(shù)。

近年來(lái)由于抗B細(xì)胞表面特異分子（CD19、CD20等）單克隆抗體的問(wèn)世，因而人們開始傾向于應(yīng)用熒光素標(biāo)記的抗CD19或CD20的單克隆抗體直接與外周血淋巴細(xì)胞反應(yīng)；或用抗CD19和CD20的單克隆抗體（第一抗體）先與淋巴細(xì)胞反應(yīng)，再與熒光素標(biāo)記的兔或羊抗鼠IgG（第二抗體）結(jié)合，熒光顯微鏡下計(jì)數(shù)或流式細(xì)胞術(shù)來(lái)計(jì)數(shù)外周血B淋巴細(xì)胞。