【化學(xué)成分】
果實(shí)含枸杞多糖,又含甜菜堿(betaine)、阿托品、天仙子胺;另含玉蜀黍黃素(zeaxanthin)、酸漿紅素(physalein)、隱黃質(zhì)(cryptoxanthin)、東莨菪素 (scopoletin)、胡蘿卜素、核黃素、煙酸、維生素B1、 B2及C.種子含氨基酸:天冬氨酸、脯氨酸、丙氨酸、亮氨酸等.化學(xué)成分研究進(jìn)展:略
【理化鑒別】
薄層層析:
樣 品 液:取剪碎的枸杞子1g,加氯仿5ml,冷浸24小時(shí), 濾過,濾液濃縮至1ml,作供試液.
對(duì)照品液:另取蘇丹黃氯仿溶液為對(duì)照品.
展 開:二者各點(diǎn)樣2μl于硅膠G-cmC板上, 以石油醚-醋酸乙酯-甲醇(9∶1∶0.5)上行展開10cm.
顯 色:在自然光下,寧夏枸杞顯11個(gè)黃色斑點(diǎn),其中1個(gè)斑點(diǎn)與對(duì)照品相對(duì)應(yīng).在紫外燈下, 原點(diǎn)有藍(lán)色及黃色熒光斑點(diǎn).
【藥理作用】
1、對(duì)免疫功能的影響:
枸杞子多糖對(duì)3H一TdR摻入小鼠脾淋巴細(xì)胞及Ts細(xì)胞的影響: 對(duì)3H一TdR摻人脾淋巴細(xì)胞的影響: 枸杞多糖(LBP)5mg/kg和10mg/(kg.天)×7天,腹腔注射可明顯提高ConA誘導(dǎo)作用下3H一TdR摻入脾T細(xì)胞值,10mg/kg可使摻入指數(shù)達(dá)到高峰,比對(duì)照組高3倍。而LBP25mg/kg和50mg/kg對(duì)脾T細(xì)胞轉(zhuǎn)化反應(yīng)有明顯抑制作用。表明LBP對(duì)脾T淋巴細(xì)胞增殖效應(yīng)與劑量有密切關(guān)系。以LBP提高脾T淋巴細(xì)胞轉(zhuǎn)化值最顯著劑量10mg/(kg.天)×7天, 觀察對(duì)B 淋巴細(xì)胞有絲分裂劑LPS誘導(dǎo)3H一TdR摻入細(xì)胞作用的影響。在LPS濃度為50.70和100μg/ml時(shí),LBP對(duì)3H一TdR摻入B細(xì)胞指數(shù)無明顯影響,表明LBP對(duì)B細(xì)胞有絲分裂劑誘導(dǎo)的細(xì)胞轉(zhuǎn)化功能不敏感。
對(duì)脾抗體形成細(xì)胞數(shù)的作用: LBP在5.20mg/(kg.天)×7天可顯著增高脾PFC數(shù),5mg/kg劑量可使PFC數(shù)達(dá)正常免疫對(duì)照組的1.4倍。而25.50mg/kg時(shí),則見PFC數(shù)明顯降低,其中25mg/kg組PFC數(shù)為正常對(duì)照組的43%。表明LBP對(duì)抗體形成細(xì)胞數(shù)的增強(qiáng)效果有適宜的劑量范圍。
對(duì)脾Ts細(xì)胞功能的影響: 采用超適量SRBC免疫(SOI)誘導(dǎo)Ts細(xì)胞法觀察到,供體小鼠脾細(xì)胞中Ts細(xì)胞可使正常免疫小鼠的PFC數(shù)抑制63%,表明SOI法可以誘導(dǎo)出對(duì)抗體生成細(xì)胞產(chǎn)生顯著抑制作用的Ts細(xì)胞。給予供體鼠LBP5mg/(kg.天)×7天后,受體鼠PFC數(shù)比SOI對(duì)照組顯著下降,說明此劑量對(duì)Ts細(xì)胞功能有增強(qiáng)作用。當(dāng)劑量增加到25、50mg/kg時(shí),LBP對(duì)Ts細(xì)胞功能的增強(qiáng)作用明顯下降。
枸杞子多糖對(duì)S180荷瘤小鼠細(xì)胞免疫功能的影響及其抑瘤作用:
枸杞子多糖對(duì)正常小鼠細(xì)胞免疫功能的影響: 小鼠腹腔注射LBP5mg/(kg.天),連續(xù)7天(do-6),于第7天取脾臟測(cè)T淋巴細(xì)胞增殖反應(yīng)。結(jié)果表明LBP可明顯提高正常小鼠經(jīng)ConA誘導(dǎo)的脾臟T淋巴細(xì)胞增殖反應(yīng),其cpm值由對(duì)照組的28410±3110提高到給藥組的64870±2571。
枸杞子多糖對(duì)S180荷瘤小鼠細(xì)胞免疫功能的影響及其抑瘤作用:小鼠皮下接種S180腫瘤細(xì)胞后2天,腹腔注射LBP10mg或20mg/(kg.天)×7天,于第9天處死小鼠,測(cè)瘤重及脾臟T淋巴細(xì)胞增殖反應(yīng)。結(jié)果表明LBP10mg和20mg/kg的抑瘤率分別為31%,39%。同時(shí)可見LBP10mg組小鼠的T淋巴細(xì)胞增殖反應(yīng)cpm值由未給藥組的139±62提高到給藥組的5581±783,RPI(Relative roliferationinde×,相對(duì)增殖指數(shù))從相當(dāng)于正常的0.3%提高到24.6%。實(shí)驗(yàn)用環(huán)磷酰胺(Cy)做陽性對(duì)照,1次皮下注射25mg/kg,抑瘤率為47%,T淋巴細(xì)胞增殖反應(yīng) CMP值為165±31。
枸杞子多糖對(duì)受環(huán)磷酰胺抑制的正常小鼠細(xì)胞免疫功能的影響:小鼠在皮下注射Cy25mg/kg同一天開始腹腔注射LBP5mg/(kg.天)×7天, 于第7天取脾臟測(cè)T細(xì)胞增殖反應(yīng)。結(jié)果加LBP后RPI為105%(單獨(dú)用Cy組小鼠的RPI為正常的33%),表明LBP完全對(duì)抗了Cy所造成的細(xì)胞免疫功能低下的作用。
枸杞子多糖與環(huán)磷酰胺合用的抑瘤作用: 小鼠皮下接種S180 細(xì)胞后2天皮下注射 Cy25mg/kg,抑瘤率為31%,同時(shí)腹腔注射LBP 10m/(kg.天)×7天, 則抑瘤率提高到47%,但無顯著差異(P>0.05)。當(dāng)Cy皮下注射l2.5mg/kg時(shí)抑瘤率為14%,其瘤重與腫瘤對(duì)照組相比無顯著差異,如同時(shí)合用LBP10mg/(kg.天)×7天,腹腔注射則抑瘤率增至54%,(P<0.01),表明LBP可增強(qiáng)Cy的抑瘤作用。
枸杞子多糖及合并應(yīng)用厭氧短棒桿菌菌苗對(duì)小鼠腹腔巨噬細(xì)胞抑制腫瘤增殖活性的影響: 枸杞子多糖給于正常小鼠腹腔注射40mg/(kg.天)×7天 能增強(qiáng)經(jīng)ConA處理的巨噬細(xì)胞抑制腫瘤靶細(xì)胞增殖的活性;LBP5、10、20、40mg/(kg.天)×7天并與小劑量(250ug/只)厭氧短棒桿菌菌苗(CorynebacteriumParvum,CP)合并應(yīng)用,具有明顯的協(xié)同效應(yīng)。在LBP濃度為20mg/kg時(shí),效應(yīng)最為顯著,對(duì)靶細(xì)胞P815及P388增殖的抑制率分別為85.5%和63.6%;CP對(duì)照組則為28.1%及24.O%。表明合并應(yīng)用LBP及CP可減少二者的用量,增強(qiáng)效應(yīng),減低CP的毒副作用。LBP主要作用于T細(xì)胞的免疫增強(qiáng)劑,能增強(qiáng)CTL,NK細(xì)胞的功能;CP則為巨噬細(xì)胞刺激劑。實(shí)驗(yàn)表明,合并應(yīng)用作用于免疫應(yīng)答不同環(huán)節(jié)的免疫增強(qiáng)劑可獲得協(xié)同效應(yīng)。實(shí)驗(yàn)還表明,LBP無論對(duì)巨噬細(xì)胞在非特異性抗腫瘤或特異性抗腫瘤過程中均具有激活作用。
枸杞子多糖對(duì)小鼠白細(xì)胞介素-2活性的增強(qiáng)作用: 在誘導(dǎo)小鼠脾細(xì)胞白細(xì)胞介素-2(IL-2)的培養(yǎng)液(脾細(xì)胞5×l0/ml和ConA4ug/ml)中加入LBP,所制備的含IL-2上清液使成年小鼠胸腺細(xì)胞在體外增殖活性([3H]TdR參入法)升高。老年小鼠IL-2促進(jìn)淋巴細(xì)胞增殖水平顯著低于成年。LBP可使老年小鼠IL-2的這種作用顯著提高,達(dá)到成年小鼠水平。實(shí)驗(yàn)表明LBP對(duì)IL-2的活性有增強(qiáng)作用并使老年小鼠IL-2活性得到恢復(fù)。
枸杞子多糖對(duì)老年小鼠免疫功能低下的調(diào)節(jié)作用: 老年小鼠脾溶血空斑形成細(xì)胞(PFC)數(shù)明顯低于正常成年小鼠水平,下降51%。給于LBP20mg/(kg.天),腹腔注射,7天,可明顯提高老年小鼠脾PFC值到正常成年水平。老年小鼠對(duì)ConA 誘導(dǎo)下3H一TdR摻入胸腺細(xì)胞值也明顯降低。給于LBP后摻入值顯著提高,在給予LBP 5mg/kg 時(shí)可使3H一TdR摻入胸腺細(xì)胞值也明顯降低。給于LBP后摻入值顯著提高,在給予LBP 5mg/kg時(shí)可使3H一TdR摻入值提高大約10倍。應(yīng)用超適劑量SRBC免疫法(SOI)表明,適宜劑量的LBP對(duì)老年小鼠抑制性T細(xì)胞(Ts)有明顯調(diào)節(jié)作用,增強(qiáng)Ts細(xì)胞的活性。
枸杞子多糖對(duì)小鼠T、殺傷T和NK細(xì)胞的免疫藥理作用及對(duì)抗環(huán)磷酰胺的免疫抑制作用: LBP5-10mg/kg,腹腔注射,可以提高小鼠脾臟T淋巴細(xì)胞的增殖功能,增強(qiáng)CTL(Cy-totoxic T lymphocyte)的殺傷功能,特異殺傷率由33%提高到67%。LBP5mg/kg,腹腔注射,可以增強(qiáng)NK細(xì)胞的殺傷功能,殺傷率由12.4%提高到18%。LBP5-10mg/kg可以對(duì)抗環(huán)磷酰胺(Cy)對(duì)小鼠T、CTL和NK細(xì)胞的免疫抑制作用;其中T淋巴細(xì)胞的相對(duì)增殖指數(shù)(RPI)由33%提高至105%,Cy對(duì)CTL 的抑制率由單用的51%降低到與LBP合用的19%和36%,NK細(xì)胞的殺傷率亦由Cy單用的9.5%提高到15%和16%。這些結(jié)果表明LBP增強(qiáng)了正常小鼠和Cy處理小鼠的T細(xì)胞介導(dǎo)的免疫反應(yīng)與NK細(xì)胞的活性。
此外,枸杞多糖還能顯著增加巨噬細(xì)胞C3b和Fc受體的數(shù)量和活力,并能減輕醋酸可的松對(duì)其的抑制作用。給大鼠灌胃枸杞袋泡茶2ml/只/天,持續(xù)2周,可明顯提高免疫球蛋白含量(尤其是IgM)和補(bǔ)體活性。
2、降血糖作用:枸杞子浸膏6g/kg,腹腔注射,可使兔血糖2-3小時(shí)內(nèi)降低13%左右,以后逐漸恢復(fù)。有人認(rèn)為其降血糖作用乃由于其中含有胍的衍生物。
3、抗脂肪肝作用:大鼠長(zhǎng)期(75天)口服果實(shí)中的甜菜堿,可升高血及肝中的磷脂水平;事先或同時(shí)服用甜菜堿可對(duì)抗四氯化碳引起的大鼠肝中磷脂、總膽固醇含量的減低,并有所提高;對(duì)BSP、SGP-T、堿性磷酸脂酶、膽堿酯酶等均有改善作用。主要是甜菜堿在體內(nèi)起甲基供應(yīng)體的作用。
4、對(duì)血壓的作用:果實(shí)水溶性提取物20mg/kg靜脈注射 可使麻醉兔血壓降低,呼吸興奮;注射阿托品切斷兩側(cè)迷走神經(jīng)可以消除其降壓作用;對(duì)離體兔心呈抑制作用,并使兔耳血管收縮,甲醇、丙酮等有機(jī)溶劑提取物也有輕微降壓作用。
5、枸杞子提取液能促進(jìn)干乳酪酸桿菌和嗜酸乳酸桿菌的生長(zhǎng)和產(chǎn)氣量。
6、枸杞子煎劑對(duì)小鼠羥脯氨酸含量和耐缺氧和抗疲勞作用的影響:羥脯氨酸(Hydroxyproline)是膠原纖維與蛋白質(zhì)中的一種氨基酸,是脯氨酸羥化而來。人體在衰老過程中,由于氧供應(yīng)不足,影響脯氨酸的羥化過程,因而造成老年人的膠原中羥脯氨酸含量低下,主要臟器縮小變形,重量減輕。由于肺功能受影響,肺活量下降,儲(chǔ)備能力減少,抵抗力減退,肌力下降,耐缺氧、抗疲勞能力下降。因此羥脯氨酸含量與衰老有關(guān)。枸杞子煎劑(13.23%濃度)給予小鼠 灌胃0.3ml/20g,每天1次,30天 后羥脯氨酸濃度與對(duì)照比較增加率達(dá)15.49%。枸杞子煎劑給予小鼠 腹腔注射 0.3ml/20g其耐缺氧能力與對(duì)照組生存時(shí)間27.9±1.3分鐘相比較,枸杞為37.5±2.5分鐘(P<0.01)??蛊趯?shí)驗(yàn)與對(duì)照比較亦有非常顯著的差異(P<0.01)。
7、抗腫瘤作用: 體外試驗(yàn)表明,枸杞子、葉對(duì)人胃腺癌KATo-Ⅲ細(xì)胞,枸杞果柄、葉對(duì)人宮頸癌Hela細(xì)胞均有明顯抑制作用,其作用機(jī)理主要表現(xiàn)在抑制細(xì)胞DNA合成,干擾細(xì)胞分裂,細(xì)胞再殖能力下降。枸杞子凍干粉混懸液和環(huán)磷酰胺聯(lián)合用藥,治療大鼠Walker癌肉瘤256,發(fā)現(xiàn)其對(duì)環(huán)磷酰胺導(dǎo)致的白細(xì)胞減少有明顯保護(hù)作用。
8、其它作用: 飼料中加入甜菜堿(4-6g/kg或8g/kg),可增加雌、雄雛雞的體重,增加產(chǎn)蛋量。小鼠灌胃參杞膏1:10 的稀釋液(0.2ml/天)14天,可使體重明顯增加,超過對(duì)照組1倍,且動(dòng)物毛色光澤,肌肉豐滿,血色鮮紅。此外,枸杞子和甜菜堿對(duì)CCl4引起的肝損害有保護(hù)作用。