家畜血吸蟲病查治技術(shù)規(guī)范

1 病原學(xué)診斷（糞便毛蚴孵化法）

1.1 材料準(zhǔn)備

1.1.1 水：pH值6.8～7.2，無水蟲和化學(xué)物質(zhì)污染（包括氯氣）的澄清水，否則需作如下處理：有氯氣的自來水應(yīng)在盛器中存放8h以上。河水、池水、井水、雨水等混有水蟲的水加溫至60℃，冷卻后再用。或在5萬ml水中加含30%有效氯的漂白粉0.35g，攪勻，放置20h，待氯氣逸盡；也可在放漂白粉后加入硫代硫酸鈉0.2～0.4g脫氯，0.5h后再用。對混濁的水，于每5萬ml水中加明礬3～5g，充分?jǐn)嚢?，待水澄清后用?

1.1.2 器材、試劑：竹筷、40～80目的銅篩濾杯、260目的尼龍篩兜、500ml量杯、糞桶、放大鏡、顯微鏡、吸管、載玻片、蓋玻片、取暖爐、水溫計(jì)、盆、水缸、水桶、剪刀、鬧鐘、天平、300～500ml長頸平底燒瓶或200～250ml三角燒瓶、脫脂棉。

1.1.3 送糞卡：包括村名、組名、飼養(yǎng)員或畜主姓名、畜別、畜名或畜號、性別、年齡、有無孕、采糞日期。

1.1.4 孵育室（箱）。室溫低于20℃時(shí)需有保持20～25℃的環(huán)境條件，如有溫箱或有取暖設(shè)備的房間。

1.2 操作方法

1.2.1 采糞和送檢：采糞季節(jié)宜于春秋兩季，其次是夏季，不宜于冬季。采糞的時(shí)間最好于清晨從家畜直腸中采取，或新排出的糞便。采糞量：牛、馬屬200g，豬100g，羊和犬糞（農(nóng)家）40g，每份糞樣需附上填好的送糞卡，于采糞當(dāng)天送到檢驗(yàn)室。

1.2.2 洗糞和孵化：將每頭家畜的糞便分三份，每份糞量牛、馬50g，豬20g，羊、犬10g.然后根據(jù)實(shí)際情況選用下列一種方法進(jìn)一步操作。

1.2.2.1 尼龍兜淘洗孵化法：糞便在40目銅篩和量杯中用清水淘洗，細(xì)糞渣存于500ml量杯中，待沉淀后去上清液，沉渣倒入尼龍兜用水沖淘洗，把尼龍兜中的糞渣裝入三角燒瓶或長頸平底燒瓶中加25℃左右清水，為便于觀察毛蚴，在瓶頸下二分之一處加一塊2～3cm厚的脫脂棉，再加清水至瓶口。

1.2.2.2 塑料杯頂管法：置糞于銅篩量杯中加水充分淘洗，棄去糞篩量杯中的上層水，倒去三分之二，加25℃清水，蓋上中間有孔的塑料蓋再加滿25℃清水，再將盛滿水的試管口塞一塊2～3cm厚的脫脂棉，倒插入塑料蓋孔中。

1.2.3 孵育：上述兩種方法裝好的三角燒瓶、長頸燒瓶或塑料杯放于20～25℃的箱（室）中，在一定的光照（日光或燈光）條件下進(jìn)行孵育。從孵育開始到1、3、5h后各觀察一次，尾蚴多數(shù)在水面下2mm范圍內(nèi)呈直線運(yùn)動(dòng)。發(fā)現(xiàn)血吸蟲毛蚴即判定為陽性。血吸蟲毛蚴肉眼觀察為針尖大小、灰白色、梭形、折光強(qiáng)和水中其他小蟲不同之處是在近水面作水平或斜向直線運(yùn)動(dòng)，當(dāng)用肉眼觀察難與水中的其他小蟲相區(qū)別時(shí)，可用滴管將毛蚴吸出，置顯微鏡下可見毛蚴前部寬，前段中間有個(gè)頂突，兩側(cè)對稱，后漸窄，周身有纖毛則可判為血吸蟲毛蚴。在一個(gè)樣品中有1～5個(gè)毛蚴為＋，6～10個(gè)毛蚴為＋＋，11～20個(gè)毛蚴為＋＋＋，21個(gè)毛蚴以上為＋＋＋＋。以判斷、統(tǒng)計(jì)血吸蟲病感染的強(qiáng)度。

2 家畜血吸蟲病血清學(xué)診斷（間接血凝試驗(yàn)）

2.1 材料準(zhǔn)備

2.1.1 器材：V型微孔有機(jī)玻璃血凝板（孔底角90°），25μl定量移液器，滴管，可插針頭的滴管或1～2ml注射器，12號針頭。

2.1.2 生理鹽水、蒸餾水。

2.1.3 診斷液和陰、陽性血清：按說明書處理和保藏。

2.2 操作方法

2.2.1 用滴管滴4滴生理鹽水于血凝板左邊第1孔內(nèi)，用同一滴管加入被檢血清1滴，使血清成5倍稀釋。

2.2.2 用帶12號針頭滴管或移液管在左邊第2、3孔中各加生理鹽水1滴（25μl）。

2.2.3 用移液器將第1孔血清混勻，混勻方法是反復(fù)吸吹三次，然后吸25μl已混勻液加入右邊鄰孔中，此孔血清成1：10稀釋。

2.2.4 用移液器和7.2.2.3一樣混勻第2孔血清，吸取25μl加入第3孔中，此時(shí)該孔血清成1：20稀釋。

2.2.5 用移液器和7.2.2.4一樣混勻第3孔血清，吸取25μl丟棄。

2.2.6 每份被檢血清和陽、陰性血清按同樣方法用3個(gè)孔，也可不用陰性血清而設(shè)生理鹽水對照孔，此時(shí)另取2個(gè)孔各加25μl生理鹽水作空白對照。

2.2.7 用帶12號針頭的滴管或移液管加入1：10、1：20血清稀釋孔及空白對照孔各1滴診斷液，使診斷液和血清混勻，置20℃～37℃條件下1～2h，等空白或陰性血清對照孔中血球全部沉于孔底中央，呈一圓形紅點(diǎn)，且陽性血清兩孔中血球沒有全部沉入孔底中央即無圓形紅點(diǎn)或僅有很小的圓形紅點(diǎn)即可判定結(jié)果。

2.3 判定

2.3.1 判定標(biāo)準(zhǔn)

2.3.1.1 紅血球全部下沉到孔底中央，形成緊密紅色圓點(diǎn)，周緣整齊為陰性（-）。

2.3.1.2 紅血球少量沉于孔底中央，形成一較陰性小的紅色圓點(diǎn)，周圍有少量凝集紅血球?yàn)槿蹶栃裕ǎ?

2.3.1.3 紅血球約半數(shù)沉于孔底中央，形成一更小紅色圓點(diǎn)，周圍有一層淡紅色凝集紅血球?yàn)殛栃裕ǎ?

2.3.1.4 紅血球均勻地分散于孔底，形成一淡紅色薄層為強(qiáng)陽性（＋＋＋）。

2.3.2 結(jié)果判定：以血清10倍和20倍稀釋孔出現(xiàn)2.3.1.2、3、4的凝集現(xiàn)象時(shí)，被檢血清判為陽性。

2.3.3 如陰性或生理鹽水對照孔2h后紅細(xì)胞沉淀圖像不標(biāo)準(zhǔn)，說明生理鹽水質(zhì)量不合標(biāo)準(zhǔn)或血凝板孔未洗凈，需檢查原因，重新操作。

3 家畜血吸蟲病的治療

3.1 治療對象的確定

凡用血清學(xué)或病原學(xué)方法查出的陽性畜，經(jīng)健康檢查除列為緩治或不治的病畜外，均應(yīng)進(jìn)行治療。

3.2 緩治或不治對象

3.2.1 懷孕6個(gè)月以上和哺乳期母牛以及3月齡以內(nèi)的犢牛可緩治。

3.2.2 有急性傳染病、心血管疾病或其他嚴(yán)重疾病的牛緩治或不治或建議淘汰。

3.2.3 年老體弱喪失勞力或生產(chǎn)能力的病牛建議淘汰。

3.3 稱重或估重

在有條件的情況下，盡可能稱重，以便準(zhǔn)確計(jì)算用藥量，無稱重條件時(shí)則可采用測量估重。

3.4 病畜治療記錄

最好以縣（市）為單位統(tǒng)一印制病畜治療記錄表。對已確定的治療對象，要認(rèn)真填寫治療登記表。在治療過程中要認(rèn)真作好記錄，治療結(jié)束后，要整理成冊，歸檔備查。

3.5 治療的藥物和方法

3.5.1 藥物：當(dāng)前用于治療血吸蟲病病畜的首選藥物是吡喹酮，其粉劑、片劑或其他劑型一次口服治療各種家畜均可達(dá)到99.3～100%的殺蟲效果。

3.5.2 劑量：因病畜種類不同和藥物劑量不同其用藥量也不盡相同。黃牛（奶牛）30mg/㎏（限重300㎏），水牛25 mg/㎏（限重400㎏），羊20 mg/㎏，豬60 mg/㎏，馬屬動(dòng)物參照水牛或羊的劑量。

3.6 藥物反應(yīng)及處理

吡喹酮一次口服療法治療家畜血吸蟲病，一般無副反應(yīng)或輕微反應(yīng)，副反應(yīng)主要表現(xiàn)為反芻減少，食欲減退，瘤胃臌氣，流涎，拉稀，心跳加快，精神沉郁，嚴(yán)重時(shí)可引起流產(chǎn)，也見有出現(xiàn)牛死亡的報(bào)告。

反應(yīng)處理：一般輕微反應(yīng)不需特殊處理，少數(shù)病例特別是老弱病畜或奶牛可能出現(xiàn)奶產(chǎn)量下降等反應(yīng)，應(yīng)加強(qiáng)觀察，采用對癥療法，即可康復(fù)。