淋巴細胞分離是免疫檢驗的重要考點，各位考生應(yīng)該熟練掌握，為此，醫(yī)學教育網(wǎng)整理了與淋巴細胞分離的相關(guān)知識，希望對各位考生有所幫助。

原理：

外周血各種血細胞的密度不盡相同，利用淋巴細胞分層液（Ficoll）作密度梯度離心，使一定比重的細胞群按相應(yīng)密度梯度分布，從而將各種血細胞加以分離。

實驗設(shè)備：

移液管、1ml移液器、刻度吸管、5ml注射器、EP管、顯微鏡、離心機。

實驗材料：

肝素、淋巴細胞分離液、RPMI1640粉末、稀釋液（生理鹽水）。

操作流程：

1.在離心管中加入適量淋巴細胞分離液。

2.無菌采集靜脈血若干毫升,注入盛有肝素的無菌小瓶中，（每1ml全血加0.1ml125-250U/ml肝素溶液）,加蓋后立即輕輕搖勻,使血液抗凝。

3.稀釋（外周血：稀釋液=1：2取肝素抗凝血與等量生理鹽水充分混勻）。

4.用刻度吸管沿傾斜的管壁，把稀釋血緩慢疊加于分層液面上，醫(yī)學/教育網(wǎng)注意保持清楚的界面（Ficoll：稀釋血=1：2）。

5.放入離心機1500r/min離心20min（注：緩慢加速1-4檔個3分鐘）。

6.用吸管插到云霧層，吸取單個核細胞。置入另一離心管中，加入5倍以上體積的稀釋液（生理鹽水），1500rpm×10分鐘離心，洗滌細胞。

7.重復洗滌一次，1500rpm×10分鐘離心。

8.末次離心后，棄上清，加入含有10%小牛血清的RPMI1640，重懸細胞。

9.計數(shù)細胞后再調(diào)整細胞置所需濃度。

10.取一滴細胞懸液與一滴0.2%臺盼蘭染液混合，于血球計數(shù)板上，計數(shù)四個大方格內(nèi)的細胞總數(shù)。

11.分離出的淋巴細胞置于培養(yǎng)瓶中二氧化碳培養(yǎng)箱培養(yǎng)。

注意事項：

1.每毫升外周血液大約可獲1×10⁶單個核細胞。

2.溫度直接影響到Ficoll的比重和分離效果。

3.在Ficoll上加入稀釋外周血時，應(yīng)緩慢加，以免沖散界面。

4.Ficoll應(yīng)適量，外周血應(yīng)充分稀釋。

5.吸取單個核細胞層時，應(yīng)避免吸出過多的上清液或分層液而導致血小板污染。

淋巴細胞計數(shù)：

實驗流程：

1.準備計數(shù)板。

2.制備細胞懸液：收集細胞，制成單個細胞懸液。

3.加樣：用吸管輕輕吹打細胞懸液，取少許細胞懸液，在計數(shù)板上蓋玻片的一側(cè)加微量細胞懸液。

4.計數(shù)：在顯微鏡下，用10×物鏡觀察計數(shù)板四角大方格中的細胞數(shù)。

5.計算：將結(jié)果代入下式，得出細胞密度。

胞數(shù)/毫升原=（4大格細胞數(shù)之和/4）×10⁴。

以上就是醫(yī)學教育網(wǎng)整理的于淋巴細胞分離的知識點，如果想了解更多相關(guān)內(nèi)容請前往醫(yī)學教育網(wǎng)進行查看。