在ELISA（酶聯(lián)免疫吸附測(cè)定）檢測(cè)中，間接法是一種常用的檢測(cè)方式。其基本原理是利用抗原-抗體之間的特異性結(jié)合反應(yīng)來檢測(cè)樣本中的目標(biāo)物質(zhì)。具體步驟如下：
1. 首先將已知的抗原固定在固相載體上（如微孔板），這個(gè)過程稱為包被。
2. 然后加入待測(cè)血清或其它樣本，如果其中含有能與上述抗原特異性結(jié)合的目標(biāo)抗體，則會(huì)形成抗原-抗體復(fù)合物。
3. 接著洗滌去除未結(jié)合的成分，以減少非特異性的背景干擾。
4. 再次加入酶標(biāo)記的二抗（即針對(duì)待測(cè)物種IgG Fc段的抗體），該二抗能夠與第一步形成的抗原-樣本抗體復(fù)合物中的抗體部分相結(jié)合。
5. 經(jīng)過洗滌去除未結(jié)合的酶標(biāo)二抗后，加入底物溶液。若存在目標(biāo)抗體，則酶標(biāo)記的二抗會(huì)催化底物發(fā)生顏色變化，通過檢測(cè)吸光度值來判斷和定量目標(biāo)抗體的存在。
間接法主要用于測(cè)定血清中特定類型的抗體（如IgG、IgM等），具有較高的靈敏度和特異性，在臨床診斷、流行病學(xué)調(diào)查等領(lǐng)域有著廣泛的應(yīng)用。