細胞因子檢測方法是臨床醫(yī)學(xué)檢驗主管技師可能涉及到的知識點,醫(yī)學(xué)教育網(wǎng)小編整理了相關(guān)知識點,供考生參考。
細胞因子檢測方法:
(一)依賴性細胞株
一些腫瘤細胞株必須依賴于細胞因子方能在體外增殖,如DTLL細胞株依賴IL-2;FDC-PL細胞株依賴于小鼠IL-3;TF-1細胞株依賴于人IL-3和人GM-CSF,因而可利用這些依賴細胞株檢測相應(yīng)的細胞因子。這種方法敏感性高,特異性也不錯,但可異的是并非所有細胞因都能找到相應(yīng)的細胞株,因而限制了它的應(yīng)用。
(二)功能檢測
利用一些細胞因子的功能特性,可建立相應(yīng)的活性測定方法,如干擾素的抑制病毒感染效應(yīng),腫瘤壞死因子對L929細胞的殺傷作用等。這樣的方法敏感性高,但特異性不夠,容易受一些擾因素的影響。
(三)免疫測定
利用抗原抗體反應(yīng)的原理,制備出抗細胞因子的單克隆抗體或多克隆抗體,可進行細胞因子的免疫檢測。這種方法的優(yōu)點是特異性強、操作簡便,缺點是靈敏度不夠,且不能代表活性測定的結(jié)果。從目前的國際發(fā)展趨勢來看,已研制出了高靈敏度、特異性高、高度配套的細胞檢測試劑盒,其應(yīng)用范圍正在擴大,有良好的發(fā)展前景。
(四)功能測定與抗體抑制
為解決功能定特異性不夠,免疫測定靈敏度不夠的問題,可將兩種方法結(jié)合起來,利用各自的長處,有可能得到較為可靠的結(jié)果。在這一方法中,所用的抗細胞因子抗體必須是具有中和活性的抗體醫(yī)`學(xué)教育網(wǎng)搜集整理。
(五)分子雜交技術(shù)
利用分子生物學(xué)技術(shù),制備出細胞因子的基因探針,可通過分子雜交技術(shù)檢測細胞內(nèi)細胞因子mRNA的表達,這是一種高度敏感和高度特異的檢測技術(shù),目前在實驗室研究中使用較廣,其缺點是操作較為繁瑣,測定結(jié)果只能代表細胞因子基因的表達,而不能代表活性細胞因子的水平。
(六)多聚酶鏈反應(yīng)技術(shù)(PCR)
PCR技術(shù)是一種高效的基因體外擴增技術(shù),目前PCR技術(shù)已用于細胞因子的檢測中,首先將細胞因子產(chǎn)生細胞的RNA提取出來,再經(jīng)逆轉(zhuǎn)錄合成cDNA,以cDNA為模板,在細胞因子引物的引導(dǎo)下,即可進行PCR擴增。這種技術(shù)是迄今最敏感的細胞因子檢測技術(shù),操作也較簡便,缺點與分子雜交技術(shù)類似,并且不容易對細胞因子表達水平進行定量。