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1.分段沉淀法：（適合于皂苷的分離）

①原理：利用皂苷難溶于乙醚、丙酮等溶劑。

②操作：將粗皂苷先溶于少量甲醇或乙醇中，然后逐滴加入乙醚、丙酮或乙醚-丙酮（1：1）的混合溶劑（加入量以能使皂苷從醇溶液中析出為限），邊加邊搖勻，皂苷即可析出。

③分段沉淀法，逐漸降低溶劑極性，極性不同的皂苷就可分批沉出，從而達(dá)到分離的目的。分段沉淀法雖然簡便，但難以分離完全。

2.膽甾醇沉淀法

①原理：皂苷可與膽甾醇生成難溶性的分子復(fù)合物（三萜皂苷與膽甾醇形成的復(fù)合物不如甾體皂苷與膽甾醇形成的復(fù)合物穩(wěn)定）。

②操作：先將粗皂苷溶于少量乙醇中，再加入膽甾醇的飽和乙醇溶液，至不再析出沉淀為止（混合后需稍加熱），濾過，取沉淀用水、醇、乙醚依次洗滌以除去糖類、色素、油脂和游離的膽甾醇，然后將此沉淀干燥后，用乙醚回流提取，膽甾醇被乙醚提出，使皂苷解脫下來，殘留物即為較純的皂苷。但是，此法已經(jīng)基本不被應(yīng)用。

3.色譜分離法

色譜法是目前分離三萜類化合物最常用的方法，通常采用多種色譜法相組合的方法。

①吸附柱色譜法；②分配柱色譜法；③高效液相色譜法；④大孔樹脂柱色譜；⑤凝膠色譜法。

（1）吸附柱色譜法：

①常用方法，可用于分離各類三萜化合物。

②依據(jù)所用的吸附劑性質(zhì)的不同，分為正相吸附柱色譜和反相吸附柱色譜。

③正相吸附柱色譜的吸附劑常用硅膠。醫(yī)學(xué)教育網(wǎng)搜集整理

④反相柱色譜通常以鍵合相硅膠Rp-18、Rp-8或Rp-2等為填充劑。

（2）分配柱色譜法：多用于分離皂苷，常用硅膠等作為支持劑，固定相為3%草酸水溶液等，流動(dòng)相為含水的混合有機(jī)溶劑：如氯仿-甲醇-水，正丁醇-水等。

（3）高效液相色譜法：是目前分離皂苷類化合物最常用的方法，分離效能較高。用于皂苷的分離制備一般采用反相色譜柱，以甲醇-水、乙腈-水等系統(tǒng)為洗脫劑。

（4）大孔樹脂柱色譜：適用于皂苷的精制和初步分離。

操作：將含有皂苷的水溶液通過大孔樹脂柱后，先用水洗滌除去糖和其他水溶性雜質(zhì)，然后再用濃度由低到高的甲醇或乙醇依次進(jìn)行梯度洗脫，極性大的皂苷可被l0%～30%的醇洗脫下來，極性小的皂苷則被50%以上的醇洗脫下來。

（5）凝膠色譜法：分子篩的原理來分離分子量不同的化合物，在用不同濃度的甲醇、乙醇或水等溶劑洗脫時(shí)，各成分按分子量遞減順序依次被洗脫下來。即分子量大的皂苷先被洗脫下來，分子量小的皂苷后被洗脫下來。應(yīng)用較多的是在有機(jī)相中使用的Sephadex LH-20.

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