[兒科學(xué)]Taq DNA聚合酶

答復(fù)：本題選E。

　　Taq DNA聚合酶是從一種水生棲熱菌（Thermusaquaticus）yT1株分離提取的。yT是 一種嗜熱真菌，能在70～75℃生長。該菌是1969年從美國黃石國家森林公園火山溫泉中分離的。該酶基因全長2496個堿基，編碼832個氨基酸，酶蛋白分子為 94KDa.其比活性為200000單位/mg.75～80℃時每個酶分子每秒鐘可延伸約150個核苷 酸，70℃延伸率大于60個核苷酸/秒，55℃時為24個核苷酸/秒。溫度過高（90℃以上） 或過低（22℃）都可影響Taq DNA聚合酶的活性，該酶雖然在90℃以上幾乎無DNA合成， 但確有良好的熱穩(wěn)定性，在PCR循環(huán)的高溫條件下仍能保持較高的活性。在92.5℃、95℃ 、97.5℃時，PCR混合物中的Taq DNA聚合酶分別經(jīng)130min，40min和5～6min后，仍可 保持50%的活性，實驗表明。PCR反應(yīng)時變性溫度為95℃～20sec，50個循環(huán)后，Taq DNA聚合酶仍有65%的活性。Taq DNA聚合酶的熱穩(wěn)定性是該酶用于PCR反應(yīng)的前提條 件，也是PCR反應(yīng)能迅速發(fā)展和廣泛應(yīng)用的原因。Taq DNA聚合酶還具有逆轉(zhuǎn)錄活性， 其作用于類似逆轉(zhuǎn)錄酶。此活性溫度一般為65～68℃，有Mn2 存在時，其逆轉(zhuǎn)錄活性 更高。

　　TaqDNA聚合酶是Mg2 依賴性酶，該酶的催化活性對Mg2 濃度非常敏感。以活性程度 很低的鮭魚精子DNA為模板，dNTP的濃度為0.7～0.8mmol/L時，用不同濃度Mg2 進(jìn)行 PCR反應(yīng)10min，測定結(jié)果為Mgcl2濃度在2.0mmol/L時該酶催化活性最高，此濃度能最 大限度地激活TaqDNA聚合酶的活性，Mg2 過高就抑制酶活性，當(dāng)Mgcl2濃度在 10mmol/L時可抑制40～50%的酶活性。由于Mg2 能與dNTP結(jié)合而影響PCR反應(yīng)液中游離 的Mg2 濃度，因而Mgcl2的濃度在不同的反應(yīng)體系中應(yīng)適當(dāng)調(diào)整，優(yōu)化濃度。一般反應(yīng) 中Mg2 濃度至少應(yīng)比dNTP總濃度高0.5～1.0mmol/L.適當(dāng)濃度的KCL能使Taq DNA聚合 酶的催化活性提高50～60%，其最適濃度為50mmol/L，高于75mmol/L時明顯抑制該酶 的活性。