
1.1在動物的選擇
一般多選用大鼠、家兔、豚鼠等動物來制備含藥血清,但不同種屬的動物,其血清成分不同,因此在選擇動物時應盡量選用與人類生物學活性近似的物種。劉成海等提出在體外培養(yǎng)實驗中宜采用同一種單一血清,既為細胞提供營養(yǎng),又為藥物提供載體,還避免了多種血清的干擾醫(yī)`學教育網(wǎng)搜集整理,一般家兔和大鼠應為首選。
1.2灌胃次數(shù)與時間間隔
有7~10d法(1次/d,連用7~10d),3次給藥法(連續(xù)給藥3次,笫1、2次間隔20h,第2、3次間隔4h),2次給藥法(第1次給藥后2h,再以相同劑量重復1次)等。各種給藥方式都是為了達到穩(wěn)態(tài)血藥濃度,從而便于藥物作用機理的研究。不過嚴格地說應該按藥物半衰期給藥,連續(xù)5~7個半衰期達到穩(wěn)態(tài)血藥濃度,但由于中藥及其復方成分復雜,半衰期很難測定,所以7~10d給藥為權(quán)宜之計。如果對藥物血清時效關系進行研究,則應另當別論。
1.3給藥劑量
在實驗中,由于含藥血清加入體外反應系統(tǒng)后,濃度將被稀釋,從而達不到在體條件下的藥物濃度,反應系統(tǒng)可能出現(xiàn)假陰性反應,針對此種情況,李氏等提出按新藥藥理研究的技術要求設計劑量給藥,將含藥血清制成冷凍干燥粉(凍干粉),以凍干粉形式加入反應系統(tǒng),使之達到所需要的濃度。劉平認為給藥劑量應以整體模型動物的有效劑量(即為臨床成人劑量的8~18倍量)為妥。
1.4含藥血清的采集
大鼠一般給藥1~2h后血藥濃度達峰值,此時血清為最佳含藥血清,超過一天的時間,大部分藥物成分已經(jīng)被代謝和排泄,藥物的直接作用消失,此時的血清為機體功能狀態(tài)血清。醫(yī)`學教育網(wǎng)搜集整理當然還要考慮例外,因此最好是通過預實驗來確定最佳采血時間。
1.5含藥血清滅活與否
許多學者觀點不一。有的將含藥血清經(jīng)56℃30min滅活,但也有的不經(jīng)滅活,直接進行體外實驗。劉成海等發(fā)現(xiàn)正常大鼠血清無論滅活與否均可維持大鼠肝貯脂細胞的貼壁生長,兩組大鼠血清對肝貯脂細胞內(nèi)3H-TdR摻入的影響無明顯差異,劉氏主張血清經(jīng)56℃30min滅活,可排除非藥理性干擾。但徐海波等認為藥物血清不宜滅活,因血清經(jīng)滅活以后,血清中含有的機體在藥物作用下產(chǎn)生的內(nèi)源性有效成分將減少或喪失,生物活性降低,會影響藥理實驗結(jié)果,而且與體內(nèi)實驗和臨床用藥情況也不相符。對于血清非藥理性干擾可采取空白對照來衡定和排除,而細胞培養(yǎng)中的微生物感染,也可用微孔濾膜除菌法來防止。