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理化鑒定是用物理的或化學(xué)的方法,對(duì)中藥材及其制劑所含的有效成分、主成分或特征性成分進(jìn)行定性、定量分析,以鑒定真?zhèn)?、評(píng)價(jià)品質(zhì)。
對(duì)于化學(xué)成分不清楚,或因次要成分的干擾而無法進(jìn)行主成分分析時(shí),可選用一些特殊的色譜、波譜峰進(jìn)行鑒定和識(shí)別。 醫(yī)學(xué)教.育網(wǎng)搜集整理
常用的理化鑒定方法主要有定性反應(yīng)、色譜法和波譜法。
?。?)顏色或沉淀反應(yīng) 各類成分因結(jié)構(gòu)或功能團(tuán)的不同,常與某些特定試劑發(fā)生反應(yīng),產(chǎn)生不同的顏色或沉淀。如生物堿與碘化鉍鉀生成橙色沉淀;蒽醌類與堿液反應(yīng)生成橙、紅、藍(lán)色;黃酮類與鹽酸鎂粉的反應(yīng),香豆精和內(nèi)酯類的異羥肟酸鐵反應(yīng),皂甙類的 Liebermann一Burchard反應(yīng),強(qiáng)心甙的K一K反應(yīng),酚類的三氯化鐵反應(yīng),鞣質(zhì)的明膠沉淀反應(yīng),氨基酸的茚三酮反應(yīng),糖類的苯酚一硫酸反應(yīng)等。
?。?)色譜法 目前已成為藥材和成藥鑒定中不可缺少的常規(guī)而有效的方法,特別是對(duì)成分復(fù)雜的中藥、天然藥物,有著分離、分析鑒定雙重的優(yōu)勢(shì)。常用的色譜鑒定方法有薄層色譜法、氣相色譜法、高效液相色譜法、紙色譜法、凝膠電泳、毛細(xì)管電泳等技術(shù)。①薄層色譜法:是中藥鑒定中最常用且簡便、直觀、經(jīng)濟(jì)的一種色譜法,樣品點(diǎn)樣展開后,可通過斑點(diǎn)的熒光或顯色反應(yīng)直接鑒定比較,也可通過掃描定性、定量分析,幾乎適用于所有的動(dòng)、植物類藥材的鑒定。最常用的是硅膠薄層色譜法。②氣相色譜法:適合于揮發(fā)性成分或通過衍生化后能夠氣化的成分的定性、定量分析,具有靈敏度高、分離效率高等優(yōu)點(diǎn),特別是氣相色譜-質(zhì)譜-計(jì)算機(jī)聯(lián)用技術(shù)的發(fā)展,對(duì)于富含揮發(fā)油類藥材的鑒別,氣相色譜已成為一種首選的方法。不揮發(fā)的成分,也可采用裂解氣相色譜或閃蒸氣相色譜來進(jìn)行鑒定。③高效液相色譜法:具有柱效高、分離度好、重現(xiàn)性好等特點(diǎn),配以不同類型的檢測器,可對(duì)多種中藥成分進(jìn)行分析,尤其適合于具有紫外吸收的化合物的分析;一般常用于含量測定,但也可根據(jù)特征色譜峰和指紋圖譜進(jìn)行定性分析,特別是三維高效液相色譜(HPLC)的發(fā)展,使定性分析更為方便。④紙色譜法:是一種分配色譜,可用于氨基酸、糖類等水溶性成分的分析。⑤凝膠電泳:適合于肽類、核酸、多糖等大分子化合物的分析鑒定。特別是分子生物學(xué)的發(fā)展, DNA指紋圖譜分析應(yīng)用于植、動(dòng)物的鑒定,與次生代謝產(chǎn)物的分析相比,更能反映物種的內(nèi)在遺傳變異規(guī)律。③毛細(xì)管電泳:是近年發(fā)展起來的新的分析技術(shù),它集HPLC與電泳技術(shù)的優(yōu)點(diǎn)于一身,使中藥成分的分析范圍更廣闊、更靈敏,因?yàn)樗鼜母旧辖鉀Q了HPLC分析最頭痛的柱效問題。
(3)波譜法 根據(jù)中藥成分結(jié)構(gòu)的不同會(huì)產(chǎn)生特征的吸收峰。常見的有可見一紫外分光光度法、紅外分光光度法、串聯(lián)質(zhì)譜、核磁共振、調(diào)線分析等。①可見一紫外分光光度法:一般用于總提取物或部分提取物中某類成分的含量分析,也可通過導(dǎo)數(shù)光譜法進(jìn)行混合物中單一組分的測定,或通過指紋圖譜進(jìn)行定性分析。②紅外分光光度法:主要用于指紋圖譜的分析、鑒定。③串聯(lián)質(zhì)譜法(MS/MS):可直接用于粉末藥材(成藥)的分析、鑒定,是一種新的質(zhì)譜技術(shù)。④核磁共振波譜法(NMR):可用于具有特定結(jié)構(gòu)類型化合物的定性、定量分析,如藥用植物中吡咯里西啶生物堿的NMR分析。⑤X線分析法:主要適用于礦物類藥材的分析、鑒定,也可應(yīng)用于粉末藥物的直接分析。
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