研究已證明,牙菌斑中產(chǎn)酸菌代謝糖生成有機酸致牙齒脫礦,是致齲的直接原因。但由于齲齒的發(fā)生是由多種因素決定的,單一的因素并不能全面反映齲病的發(fā)生或進行過程。一些學(xué)者報道患齲者菌斑中有機酸的含量高于無齲者或無差異,但并不能確定造成這種現(xiàn)象的原因是菌斑產(chǎn)酸量的差異還是口腔對酸的緩沖和清除能力的差異。我們用高效毛細(xì)管電泳法分析個體患者牙菌斑中幾種短鏈有機酸的含量,比較高活動齲者和無齲者體內(nèi)和體外菌斑產(chǎn)酸量的差異,以期對前述問題有所回答。
材料和方法
1.受試者:分別在美國波士頓和北京選擇42例受試者,均為在校大學(xué)生,年齡20歲左右。波士頓組:無齲6例;活動性齲9例,DMFS≥10。北京組:無齲15例;活動性齲12例,DMFS≥8。
2.菌斑產(chǎn)酸實驗:囑受試者78h不刷牙,菌斑取樣前10h以上不進食,分別進行下述實驗。①口內(nèi)菌斑代謝糖前后菌斑液的提取(波士頓組):分別用10%蔗糖漱口(1min)前和漱口后7min獲取全口(除去下頜前牙)菌斑樣品,離心得個體菌斑液,待測。②體外菌斑代謝糖后菌斑外液的提取(波士頓組):臨床取菌斑,在實驗室內(nèi)加等量10%蔗糖液于菌斑表面,37℃孵育1h,直接離心取上清液(菌斑外液),待測。③體外菌斑代謝糖前后菌斑提取液中有機酸的變化(北京組):臨床取菌斑,在實驗室內(nèi)加等量10%蔗糖液混勻,37℃孵育1h,樣品經(jīng)超聲粉碎10s(60Hz,末端輸出6,美國科默公司4710型超聲粉碎儀),再離心取上清液(菌斑提取液),待測醫(yī)學(xué)教育 網(wǎng)搜集整理。
3.有機酸分析:方法見另文報道。分別使用毛細(xì)管電泳儀PACE205(波士頓組)和SpectraPhoresis500(北京組)分析測定有機酸,包括乳酸、乙酸、丙酸、丁酸、琥珀酸、丙酮酸和甲酸。兩地分析用的流動相為十四烷基三甲基溴化銨(TTAB),pH5.5。
結(jié)果
波士頓組受試者停止刷牙72h并禁食10h以后的菌斑液和用10%蔗糖漱口后7min鐘菌斑液中的6種有機酸水平見表1。丙酮酸的水平位于儀器的檢測下限,未列于表中。
上述波士頓組受試者再次停止刷牙72h并禁食10h以后,獲得的菌斑在實驗室與糖反應(yīng)1h,測得菌斑外液的4種主要有機酸水平見表2。因設(shè)備的原因,此組未計算甲酸、丁酸和丙酮酸含量。
北京組受試者停止刷牙72h并禁食10h以后,所獲菌斑在實驗室與糖反應(yīng)1h,測菌斑提取液中7種有機酸水平并與同一個體未進行糖反應(yīng)者比較,見表3。