由于細(xì)菌產(chǎn)生的酶系不同，因而對(duì)底物的分解能力不同，其代謝產(chǎn)物也不同。用生物化學(xué)方法測(cè)定這些代謝產(chǎn)物，可用來鑒定細(xì)菌，這種生化反應(yīng)測(cè)定方法也稱生化試驗(yàn)。

　　細(xì)菌的生化試驗(yàn)是將已分離純化的待檢細(xì)菌，接種到一系列含有特殊物質(zhì)和指示劑的鑒別培養(yǎng)基中，觀察該菌在這些培養(yǎng)基內(nèi)的pH變化，或是否產(chǎn)生某種特殊的代謝產(chǎn)物，現(xiàn)代細(xì)菌學(xué)已普遍采用微量、快速、自動(dòng)化等鑒定系統(tǒng)，已有很多相應(yīng)的配套試劑供種屬鑒定使用，常見的生化試驗(yàn)有：

　　1.糖（醇、苷）類發(fā)酵試驗(yàn)：各種細(xì)菌分解糖（醇、苷）的能力不同，分解后代謝產(chǎn)物不同，可根據(jù)其分解產(chǎn)物鑒別細(xì)菌。實(shí)際應(yīng)用中，可選擇合適的含有單糖、雙糖、三糖或多糖的培養(yǎng)基醫(yī)學(xué)|教育網(wǎng)搜集整理，接種待檢菌，經(jīng)培養(yǎng)后觀察結(jié)果。若能分解糖類產(chǎn)酸，培養(yǎng)基中的指示劑呈酸性反應(yīng)；產(chǎn)氣的細(xì)菌則出現(xiàn)氣泡或裂隙。如大腸桿菌能分解乳糖，傷寒桿菌與痢疾桿菌則不能，用此可加以區(qū)別。糖發(fā)酵試驗(yàn)是鑒定細(xì)菌最常用的生化反應(yīng)，特別用于腸桿菌科細(xì)菌的鑒定。

　　2.甲基紅試驗(yàn)：細(xì)菌分解葡萄糖形成丙酮酸，丙酮酸進(jìn)一步分解成甲酸、乙酸、乳酸等混合酸，使培養(yǎng)基pH下降至4.4以下，加入甲基紅指示劑變?yōu)榧t色。若產(chǎn)酸量少或?qū)⑺徇M(jìn)一步分解為醇、酮、醛等，使培養(yǎng)基pH在5.4以上，甲基紅試驗(yàn)則呈橘黃色。該試驗(yàn)簡(jiǎn)稱為MR試驗(yàn)。將待檢菌接種于葡萄糖蛋白胨水培養(yǎng)基內(nèi)，培養(yǎng)后滴加甲基紅試劑，呈紅色為MR試驗(yàn)陽性，橘紅色為弱陽性，橘黃色為陰性。該試驗(yàn)主要用于大腸埃希菌和產(chǎn)氣腸桿菌的鑒別，前者陽性，后者陰性。

　　3.VP試驗(yàn)：有些細(xì)菌能使丙酮酸脫羧生成乙酰甲基甲醇，進(jìn)而在堿性溶液中被空氣中的氧氧化成雙乙酰，雙乙酰在α-萘酚和肌酸的催化下，生成紅色化合物，為VP試驗(yàn)陽性。將待檢菌接種于葡萄糖蛋白胨水培養(yǎng)基，培養(yǎng)后按每毫升培養(yǎng)基加入含0.3%肌酸或肌酐的0.1ml40%KOH溶液，48～50℃水浴2h或37℃4h，充分搖動(dòng)后觀察結(jié)果，紅色為VP試驗(yàn)陽性。

　　4.吲哚試驗(yàn)：有些細(xì)菌含有色氨酸酶，分解培養(yǎng)基中的色氨酸產(chǎn)生吲哚，吲哚與對(duì)二甲基氨基苯甲醛作用，形成玫瑰吲哚而呈紅色。該試驗(yàn)也稱靛基質(zhì)試驗(yàn)。將待檢菌接種于蛋白胨水培養(yǎng)基中，培養(yǎng)后沿管壁加入對(duì)二甲基氨基苯甲醛試劑0.5ml，使其形成兩層液面，兩液面接觸處呈紅色為陽性，無色為陰性醫(yī)學(xué)|教育網(wǎng)搜集整理。該試驗(yàn)主要用于腸道桿菌的鑒定。

　　5.硫化氫試驗(yàn)：有些細(xì)菌分解含硫氨基酸生成硫化氫，遇培養(yǎng)基中的醋酸鉛或硫酸亞鐵可形成黑色的硫化鉛或硫化亞鐵沉淀。將待檢菌接種于醋酸鉛培養(yǎng)基中培養(yǎng)，有黑色沉淀者為陽性，無變化者為陰性。H2S試驗(yàn)常用于腸桿菌科菌屬間的鑒定。