醫(yī)學(xué)教育網(wǎng)小編整理了“循環(huán)免疫復(fù)合物檢測法”相關(guān)知識供大家參考學(xué)習(xí),希望對大家有所幫助!
(一)物理測定法
1.聚乙二醇法
聚乙二醇(PEG)是乙二醇聚合而成的無電荷形多糖分子,分子量變化范圍較大,常用的分子量是6000.用3%~4%濃度的PEG可以選擇性地將大分子免疫復(fù)合物沉淀下來,其作用機制尚不甚清楚。將PEG溶液與待檢血清混合,置4℃冰箱過夜后離心,將沉淀物用PEG溶液充分洗滌,重新溶解于0.01mol/L的NaOH中,在波長280nm下測量溶液的吸光度;也可利用散射比濁法直接測定PEG沉淀的免疫復(fù)合物;以不同濃度的熱聚合IgG作為參考標(biāo)準(zhǔn)來計算CIC的含量。
聚乙二醇法簡單易行,可在臨床工作中推廣。但此法易受多種大分子蛋白和溫度的干擾,特異性稍差。PEG法還特別適用于沉淀獲得CIC,再進行解離分析其中的抗原與抗體。
2.冷球蛋白測定
在某些病理情況下,血清中的免疫復(fù)合物具有可逆性冷沉淀的特性,于4℃冰箱中放置1~3天可自發(fā)地沉淀下來;此種情況多見于冷球蛋白血癥,所涉及的抗原包括自身的IgG、IgM、核苷酸、腫瘤相關(guān)抗原、腎小管上皮、甲狀腺球蛋白、紅細胞基質(zhì)等,還有外源性抗原如乙肝病毒、EB病毒、巨細胞病毒、牛白蛋白和馬蛋白等。
(二)補體相關(guān)測定法
IgG和IgM類抗體與抗原結(jié)合后,重鏈CH2區(qū)的補體結(jié)合點暴露,可以固定C1q并激活補體的系列反應(yīng),這是利用補體有關(guān)技術(shù)檢測免疫復(fù)合物的基礎(chǔ)。醫(yī)學(xué)教育網(wǎng)|搜集整理
1.C1q結(jié)合試驗將待檢血清先行加熱56℃30min,以滅活其中的補體和破壞已與CIC結(jié)合的C1q,空出補體結(jié)合點。CIC與C1q的結(jié)合可用多種方法進行檢測,常用的有以下3種。
(1)液相法:先將同位素標(biāo)記的C1q與滅活過的血清標(biāo)本混合作用,再加入0.5%(終濃度)的PEG將結(jié)合了C1q的CIC沉淀下來,通過檢測沉淀物中的放射活性來計算CIC的含量。
(2)固相法:先將C1q吸附于固相載體表面,加入待檢血清使CIC與C1q結(jié)合,再加入同位標(biāo)記的或酶標(biāo)記的抗人IgG或SPA,最后檢測其放射活性或酶活性。
(3)C1q偏離試驗:先將同位素標(biāo)記的C1q與滅活的血清標(biāo)本混合,再加抗體致敏的綿羊紅細胞,溫育后離心,檢測紅細胞上的放射活性。紅細胞的放射活性與免疫復(fù)合物的量呈負相關(guān)。
2.補體試驗本法的原理類似補體結(jié)合試驗。將一定量的補體(多為混合豚鼠血清)與滅活的待檢血清混合溫育,反應(yīng)后加入致敏綿羊紅細胞。如出現(xiàn)溶血表示血清中沒有CIC存在;不溶血說明標(biāo)本中有CIC存在。將血清標(biāo)本做不同稀釋,并與已知的熱聚合IgG作對照,可以計算出CIC的含量。本方法的靈敏度較高,且易于在一般實驗室開展,不足之處是特異性較差。
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