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測定酶活性濃度的兩大類方法分別是什么呢?

2020-05-13 19:58 來源:醫(yī)學教育網
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測定酶活性濃度的兩大類方法分別是什么呢?跟著小編來學習一下吧!

1.固定時間法(取樣法、終點法、兩點法)

先讓酶與底物在一定溫度下作用一段固定的時間,然后停止酶反應,加入試劑進入化學反應呈色測出底物和產物的變化。

用這類方法測酶活性濃度,必須保證酶和底物在所選定的溫度下作用時間要很精確,否則將引起較大誤差。

該法最基本的一點是停止反應后才測定底物或產物的變化。

2.連續(xù)監(jiān)測法(速率法)

連續(xù)監(jiān)測法具有測定準確等眾多的優(yōu)點,隨著科學技術的發(fā)展,自動生化儀的使用,正在逐步取代“固定時間法”。實際工作中,測酶活性濃度常用酶偶聯(lián)法。

最簡單的酶偶聯(lián)反應為以下模式:

圖片3

A:底物

B:待測酶產物(不能直接測定)

C:指示酶產物(可以直接測定)

Ex:待測酶

Ei:指示酶

如果一些酶反應找不到合適的指示酶與其直接偶聯(lián),可以加入另一種酶,將兩者連接起來,模式如下:

圖片4

酶偶聯(lián)反應與一般酶反應的一個重要區(qū)別是有一個明顯的延滯期。從酶反應開始至穩(wěn)態(tài)期間,指示酶反應較慢且不穩(wěn)定,稱為延滯期。

反應體系中不應有中間產物堆積,否則將導致誤差。

以上是小編為大家整理的內容,希望對大家有所幫助,更多關于臨床檢驗主管技師的資訊請關注醫(yī)學教育網! 

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