酶聯(lián)免疫斑點試驗（ELISPOT）的原理是什么呢？快來跟著小編了解一下吧！

（一）原理：細胞受到刺激后局部產(chǎn)生細胞因子，被PVDF膜上特異性單克隆抗體捕獲。細胞分解后，再與生物素標(biāo)記的二抗結(jié)合，其后再與堿性磷酸酶標(biāo)記的親和素結(jié)合。BCIP/NBT底物孵育后，PVDF膜出現(xiàn)“紫色”的斑點為陽性反應(yīng)。

（二）ELISPOT與ELISA的區(qū)別

1.ELISA通過顯色反應(yīng)，在酶標(biāo)儀上測定吸光度，與標(biāo)準(zhǔn)曲線比較得出可溶性蛋白總量。

2.ELISPOT通過顯色反應(yīng)，在細胞分泌這種可溶性蛋白的相應(yīng)位置上顯現(xiàn)清晰可辨的斑點，可直接在顯微鏡下或通過儀器對斑點進行計數(shù)，1個斑點代表1個細胞，從而計算出分泌該蛋白的細胞的頻率。

3.由于是單細胞水平檢測，ELISPOT比ELISA和有限稀釋法等更靈敏，能從20萬～30萬個細胞中檢出1個分泌該蛋白的細胞。

4.捕獲抗體為高親和力、高特異性和低內(nèi)毒素McAb，在研究者以刺激劑激活細胞時，不會影響活化細胞分泌細胞因子。

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