酶免疫技術(shù)有哪些類型?
酶免疫技術(shù)是利用酶與抗體或抗原結(jié)合,通過(guò)酶催化底物產(chǎn)生顏色反應(yīng)來(lái)檢測(cè)特定抗原或抗體的技術(shù)。根據(jù)不同的原理和技術(shù)特點(diǎn),酶免疫技術(shù)可以分為幾類:
1. 直接法:該方法中,特異性抗體直接與酶標(biāo)記的抗原相結(jié)合,或者特異性抗原直接與酶標(biāo)記的抗體結(jié)合。當(dāng)加入底物后,如果存在目標(biāo)抗原或抗體,則會(huì)產(chǎn)生顏色變化。
2. 間接法:這種方法首先使用未標(biāo)記的一級(jí)抗體(如抗人IgG)與待測(cè)樣本中的目標(biāo)物質(zhì)反應(yīng)形成復(fù)合物,然后再用酶標(biāo)二級(jí)抗體識(shí)別并結(jié)合一級(jí)抗體。最后通過(guò)添加底物來(lái)觀察顯色情況,以此判斷目標(biāo)物質(zhì)的存在與否及其濃度。
3. 競(jìng)爭(zhēng)法:在競(jìng)爭(zhēng)性酶免疫測(cè)定中,已知量的酶標(biāo)記抗原與待測(cè)樣品中的未知抗原競(jìng)爭(zhēng)有限數(shù)量的特異性抗體位點(diǎn)。根據(jù)剩余未結(jié)合的酶標(biāo)抗原多少來(lái)推算出樣本中目標(biāo)抗原的含量。
4. 捕獲法(夾心法):此方法適用于檢測(cè)雙價(jià)或多價(jià)的大分子抗原。首先使用固相載體上的捕獲抗體固定住待測(cè)樣品中的目標(biāo)抗原,然后加入另一種酶標(biāo)記的特異性抗體與之結(jié)合形成“三明治”結(jié)構(gòu)。最后通過(guò)添加底物測(cè)定顏色變化程度來(lái)確定目標(biāo)抗原的濃度。
5. 斑點(diǎn)ELISA:這是一種將待檢測(cè)物質(zhì)直接吸附到硝酸纖維膜上進(jìn)行酶聯(lián)免疫反應(yīng)的技術(shù),操作簡(jiǎn)便快速,適合于大量樣品篩查。
每種類型的酶免疫技術(shù)都有其適用范圍和優(yōu)缺點(diǎn),在實(shí)際應(yīng)用中需根據(jù)具體需求選擇合適的方法。
1. 直接法:該方法中,特異性抗體直接與酶標(biāo)記的抗原相結(jié)合,或者特異性抗原直接與酶標(biāo)記的抗體結(jié)合。當(dāng)加入底物后,如果存在目標(biāo)抗原或抗體,則會(huì)產(chǎn)生顏色變化。
2. 間接法:這種方法首先使用未標(biāo)記的一級(jí)抗體(如抗人IgG)與待測(cè)樣本中的目標(biāo)物質(zhì)反應(yīng)形成復(fù)合物,然后再用酶標(biāo)二級(jí)抗體識(shí)別并結(jié)合一級(jí)抗體。最后通過(guò)添加底物來(lái)觀察顯色情況,以此判斷目標(biāo)物質(zhì)的存在與否及其濃度。
3. 競(jìng)爭(zhēng)法:在競(jìng)爭(zhēng)性酶免疫測(cè)定中,已知量的酶標(biāo)記抗原與待測(cè)樣品中的未知抗原競(jìng)爭(zhēng)有限數(shù)量的特異性抗體位點(diǎn)。根據(jù)剩余未結(jié)合的酶標(biāo)抗原多少來(lái)推算出樣本中目標(biāo)抗原的含量。
4. 捕獲法(夾心法):此方法適用于檢測(cè)雙價(jià)或多價(jià)的大分子抗原。首先使用固相載體上的捕獲抗體固定住待測(cè)樣品中的目標(biāo)抗原,然后加入另一種酶標(biāo)記的特異性抗體與之結(jié)合形成“三明治”結(jié)構(gòu)。最后通過(guò)添加底物測(cè)定顏色變化程度來(lái)確定目標(biāo)抗原的濃度。
5. 斑點(diǎn)ELISA:這是一種將待檢測(cè)物質(zhì)直接吸附到硝酸纖維膜上進(jìn)行酶聯(lián)免疫反應(yīng)的技術(shù),操作簡(jiǎn)便快速,適合于大量樣品篩查。
每種類型的酶免疫技術(shù)都有其適用范圍和優(yōu)缺點(diǎn),在實(shí)際應(yīng)用中需根據(jù)具體需求選擇合適的方法。
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