顯微鏡下如何準(zhǔn)確計數(shù)紅細胞?
在顯微鏡下準(zhǔn)確計數(shù)紅細胞,通常采用血細胞計數(shù)板(如Neubauer改良型計數(shù)板)進行。具體步驟如下:
1. 準(zhǔn)備樣品:首先將血液稀釋到適當(dāng)?shù)臐舛?,一般情況下是用等滲的鹽水或者專門的稀釋液按一定比例稀釋,比如1:200的比例。
2. 加樣:使用微量移液器吸取少量稀釋后的血樣(通常為10微升),然后輕輕滴加至計數(shù)板的凹槽中。確保液體完全覆蓋計數(shù)區(qū)域但不要溢出。
3. 覆蓋蓋玻片:將專用的蓋玻片平穩(wěn)地放在計數(shù)板上,避免產(chǎn)生氣泡。
4. 顯微鏡觀察:選擇合適的放大倍率(通常為10x或20x),找到計數(shù)板上的特定區(qū)域進行觀察。Neubauer改良型計數(shù)板上有五個大方格區(qū),每個大格又分為16個小方格。一般選取四個角的大方格和中間的一個大格共5個區(qū)域來計數(shù)紅細胞。
5. 計數(shù):在選定的區(qū)域內(nèi)逐個計數(shù)所有可見的紅細胞。遵循“左不右、上不算下”的原則,即只計算位于邊界線左側(cè)或上方的細胞;若細胞正好落在兩條線相交處,則僅計算左上線和右下線上的細胞。
6. 計算濃度:根據(jù)所使用的稀釋比例及計數(shù)板的具體規(guī)格,將實際觀察到的數(shù)量轉(zhuǎn)換成每微升血液中的紅細胞數(shù)目。例如,如果Neubauer改良型計數(shù)板上5個區(qū)域共觀察到了N個紅細胞,并且是按照1:200的比例稀釋,則原血樣中每微升的紅細胞數(shù)量為:(N/5) 200 10^4。
7. 數(shù)據(jù)記錄與分析:將計算結(jié)果記錄下來,必要時進行多次重復(fù)實驗以提高準(zhǔn)確性,并對數(shù)據(jù)進行統(tǒng)計學(xué)處理。
需要注意的是,在整個過程中要嚴(yán)格遵守?zé)o菌操作規(guī)范,避免污染樣本。此外,顯微鏡的清潔維護也很重要,保證視野清晰干凈有助于獲得更準(zhǔn)確的結(jié)果。
1. 準(zhǔn)備樣品:首先將血液稀釋到適當(dāng)?shù)臐舛?,一般情況下是用等滲的鹽水或者專門的稀釋液按一定比例稀釋,比如1:200的比例。
2. 加樣:使用微量移液器吸取少量稀釋后的血樣(通常為10微升),然后輕輕滴加至計數(shù)板的凹槽中。確保液體完全覆蓋計數(shù)區(qū)域但不要溢出。
3. 覆蓋蓋玻片:將專用的蓋玻片平穩(wěn)地放在計數(shù)板上,避免產(chǎn)生氣泡。
4. 顯微鏡觀察:選擇合適的放大倍率(通常為10x或20x),找到計數(shù)板上的特定區(qū)域進行觀察。Neubauer改良型計數(shù)板上有五個大方格區(qū),每個大格又分為16個小方格。一般選取四個角的大方格和中間的一個大格共5個區(qū)域來計數(shù)紅細胞。
5. 計數(shù):在選定的區(qū)域內(nèi)逐個計數(shù)所有可見的紅細胞。遵循“左不右、上不算下”的原則,即只計算位于邊界線左側(cè)或上方的細胞;若細胞正好落在兩條線相交處,則僅計算左上線和右下線上的細胞。
6. 計算濃度:根據(jù)所使用的稀釋比例及計數(shù)板的具體規(guī)格,將實際觀察到的數(shù)量轉(zhuǎn)換成每微升血液中的紅細胞數(shù)目。例如,如果Neubauer改良型計數(shù)板上5個區(qū)域共觀察到了N個紅細胞,并且是按照1:200的比例稀釋,則原血樣中每微升的紅細胞數(shù)量為:(N/5) 200 10^4。
7. 數(shù)據(jù)記錄與分析:將計算結(jié)果記錄下來,必要時進行多次重復(fù)實驗以提高準(zhǔn)確性,并對數(shù)據(jù)進行統(tǒng)計學(xué)處理。
需要注意的是,在整個過程中要嚴(yán)格遵守?zé)o菌操作規(guī)范,避免污染樣本。此外,顯微鏡的清潔維護也很重要,保證視野清晰干凈有助于獲得更準(zhǔn)確的結(jié)果。
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