制備單抗的主要方法是什么?
制備單克隆抗體(單抗)的主要方法是雜交瘤技術。這項技術是由Kohler和Milstein在1975年發(fā)明的,他們也因此獲得了諾貝爾生理學或醫(yī)學獎。該過程主要包括以下幾個步驟:
首先,選擇合適的動物(通常是小鼠),用目標抗原進行免疫接種,激發(fā)體內產生特異性抗體的B淋巴細胞。
然后,從免疫后的小鼠脾臟中提取這些已激活的B淋巴細胞,并與骨髓瘤細胞融合,形成雜交瘤細胞。這種骨髓瘤細胞具有無限增殖的能力。
接下來,在特定的選擇性培養(yǎng)基(如HAT選擇培養(yǎng)基)上篩選出能夠生存并分泌所需單抗的雜交瘤細胞。只有成功融合了的細胞才能在這種特殊環(huán)境下存活下來。
之后,通過有限稀釋法或其他方法對陽性克隆進行亞克隆化處理,以確保每個孔中只有一個細胞生長,從而保證獲得均一的抗體來源。
最后,將篩選得到的優(yōu)質雜交瘤細胞擴大培養(yǎng),并收集上清液或腹水中產生的單抗用于后續(xù)研究和應用。此外,還可以通過基因工程方法改造雜交瘤細胞,提高其穩(wěn)定性和產量,或者直接在哺乳動物細胞系中表達重組形式的人源化或全人源單抗。
以上就是制備單克隆抗體的主要步驟。隨著生物技術的發(fā)展,現(xiàn)在還有其他一些新的方法用于單抗的生產,比如噬菌體展示技術和轉基因小鼠技術等。
首先,選擇合適的動物(通常是小鼠),用目標抗原進行免疫接種,激發(fā)體內產生特異性抗體的B淋巴細胞。
然后,從免疫后的小鼠脾臟中提取這些已激活的B淋巴細胞,并與骨髓瘤細胞融合,形成雜交瘤細胞。這種骨髓瘤細胞具有無限增殖的能力。
接下來,在特定的選擇性培養(yǎng)基(如HAT選擇培養(yǎng)基)上篩選出能夠生存并分泌所需單抗的雜交瘤細胞。只有成功融合了的細胞才能在這種特殊環(huán)境下存活下來。
之后,通過有限稀釋法或其他方法對陽性克隆進行亞克隆化處理,以確保每個孔中只有一個細胞生長,從而保證獲得均一的抗體來源。
最后,將篩選得到的優(yōu)質雜交瘤細胞擴大培養(yǎng),并收集上清液或腹水中產生的單抗用于后續(xù)研究和應用。此外,還可以通過基因工程方法改造雜交瘤細胞,提高其穩(wěn)定性和產量,或者直接在哺乳動物細胞系中表達重組形式的人源化或全人源單抗。
以上就是制備單克隆抗體的主要步驟。隨著生物技術的發(fā)展,現(xiàn)在還有其他一些新的方法用于單抗的生產,比如噬菌體展示技術和轉基因小鼠技術等。
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