抗血清純化的主要方法有哪些?
抗血清純化的主要方法有以下幾種:
1. 鹽析法 這是利用不同蛋白質(zhì)在一定濃度的中性鹽溶液中的溶解度不同,通過(guò)調(diào)節(jié)鹽的濃度使目標(biāo)蛋白沉淀下來(lái)的方法。常用的是硫酸銨或硫酸鈉。
2. 層析技術(shù) 包括離子交換層析、凝膠過(guò)濾層析和親和層析等。其中,親和層析是利用抗原與抗體之間的特異性結(jié)合力進(jìn)行純化的一種高效方法,特別適用于從粗制抗血清中提純特定的抗體。
3. 超濾法 通過(guò)半透膜的選擇性透過(guò)作用,可將分子量較大的免疫球蛋白與其他小分子物質(zhì)分離出來(lái)。此方法操作簡(jiǎn)便、快速且能較好地保持抗體活性。
4. 密度梯度離心 利用不同蛋白質(zhì)在密度梯度介質(zhì)中的沉降速度差異進(jìn)行分離純化。
5. 電泳技術(shù) 如等電聚焦電泳,根據(jù)蛋白質(zhì)的等電點(diǎn)差異實(shí)現(xiàn)分離。
6. 色譜法 包括高效液相色譜(HPLC)和薄層色譜等,可以對(duì)經(jīng)過(guò)初步純化的抗血清樣品進(jìn)一步精制。
以上各種方法各有優(yōu)缺點(diǎn),在實(shí)際應(yīng)用中往往需要結(jié)合具體情況進(jìn)行選擇或組合使用。
1. 鹽析法 這是利用不同蛋白質(zhì)在一定濃度的中性鹽溶液中的溶解度不同,通過(guò)調(diào)節(jié)鹽的濃度使目標(biāo)蛋白沉淀下來(lái)的方法。常用的是硫酸銨或硫酸鈉。
2. 層析技術(shù) 包括離子交換層析、凝膠過(guò)濾層析和親和層析等。其中,親和層析是利用抗原與抗體之間的特異性結(jié)合力進(jìn)行純化的一種高效方法,特別適用于從粗制抗血清中提純特定的抗體。
3. 超濾法 通過(guò)半透膜的選擇性透過(guò)作用,可將分子量較大的免疫球蛋白與其他小分子物質(zhì)分離出來(lái)。此方法操作簡(jiǎn)便、快速且能較好地保持抗體活性。
4. 密度梯度離心 利用不同蛋白質(zhì)在密度梯度介質(zhì)中的沉降速度差異進(jìn)行分離純化。
5. 電泳技術(shù) 如等電聚焦電泳,根據(jù)蛋白質(zhì)的等電點(diǎn)差異實(shí)現(xiàn)分離。
6. 色譜法 包括高效液相色譜(HPLC)和薄層色譜等,可以對(duì)經(jīng)過(guò)初步純化的抗血清樣品進(jìn)一步精制。
以上各種方法各有優(yōu)缺點(diǎn),在實(shí)際應(yīng)用中往往需要結(jié)合具體情況進(jìn)行選擇或組合使用。
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