ELISA檢測中,抗原抗體結(jié)合的信號如何放大?
在ELISA(酶聯(lián)免疫吸附測定)檢測中,為了提高檢測靈敏度和準確性,常常需要對抗原抗體結(jié)合的信號進行放大。這種放大的機制主要依賴于酶標二抗或鏈霉親和素-生物素系統(tǒng)等方法來實現(xiàn)。
1. 酶標二抗法:首先用特異性的一抗與待測樣品中的目標分子(抗原)結(jié)合,然后加入帶有特定酶標記的二抗。這個二抗能夠識別并結(jié)合到一抗上。當?shù)孜锶芤罕惶砑訒r,酶會催化底物發(fā)生化學反應產(chǎn)生顏色變化或其他可檢測的變化,如熒光或發(fā)光等。通過測量這些變化的程度可以間接反映出目標分子的存在量。
2. 鏈霉親和素-生物素系統(tǒng):此方法利用了鏈霉親和素與生物素之間極高的親和力。首先將待測抗原固定在板上,并用生物素化的抗體進行孵育,使它們結(jié)合形成復合物;接著加入鏈霉親和素-酶復合物,由于鏈霉親和素能特異性地識別并緊密結(jié)合至生物素分子上,因此可以進一步增強信號強度。最后通過添加底物來產(chǎn)生可檢測的信號變化。
這兩種方法都能有效地放大ELISA中的信號,從而提高檢測靈敏度。選擇哪種方式取決于具體的實驗條件和需求。
1. 酶標二抗法:首先用特異性的一抗與待測樣品中的目標分子(抗原)結(jié)合,然后加入帶有特定酶標記的二抗。這個二抗能夠識別并結(jié)合到一抗上。當?shù)孜锶芤罕惶砑訒r,酶會催化底物發(fā)生化學反應產(chǎn)生顏色變化或其他可檢測的變化,如熒光或發(fā)光等。通過測量這些變化的程度可以間接反映出目標分子的存在量。
2. 鏈霉親和素-生物素系統(tǒng):此方法利用了鏈霉親和素與生物素之間極高的親和力。首先將待測抗原固定在板上,并用生物素化的抗體進行孵育,使它們結(jié)合形成復合物;接著加入鏈霉親和素-酶復合物,由于鏈霉親和素能特異性地識別并緊密結(jié)合至生物素分子上,因此可以進一步增強信號強度。最后通過添加底物來產(chǎn)生可檢測的信號變化。
這兩種方法都能有效地放大ELISA中的信號,從而提高檢測靈敏度。選擇哪種方式取決于具體的實驗條件和需求。
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