雜交瘤技術(shù)的核心步驟是什么?
雜交瘤技術(shù)的核心步驟主要包括以下幾個方面:
1. 免疫動物:選擇適當(dāng)?shù)膶嶒瀯游铮ㄈ缧∈螅ㄟ^注射特定抗原使動物產(chǎn)生免疫反應(yīng),從而在體內(nèi)形成能夠識別該抗原的B淋巴細(xì)胞。
2. 融合細(xì)胞:將上述免疫后的脾臟中提取出的B淋巴細(xì)胞與一種可以無限增殖但自身不能分泌抗體的骨髓瘤細(xì)胞進(jìn)行融合。通常使用聚乙二醇(PEG)作為促融劑來促進(jìn)兩種細(xì)胞之間的融合過程,形成雜交瘤細(xì)胞。
3. 篩選克?。簩⑷诤虾蟮幕旌霞?xì)胞接種到選擇性培養(yǎng)基中,只有成功融合形成的雜交瘤細(xì)胞才能生存并增殖。通過有限稀釋法或其他方法篩選出能夠穩(wěn)定分泌所需單克隆抗體的單一細(xì)胞系(即克?。?br/>4. 擴增與純化:對篩選出來的陽性克隆進(jìn)行擴增,并采用適當(dāng)?shù)姆椒◤呐囵B(yǎng)上清或小鼠腹水中提取和純化目標(biāo)單抗。
5. 鑒定與應(yīng)用:最后,需要對抗體的特異性、親和力等性質(zhì)進(jìn)行全面鑒定,確保其符合預(yù)期要求后方可用于科研或臨床檢測等領(lǐng)域。
1. 免疫動物:選擇適當(dāng)?shù)膶嶒瀯游铮ㄈ缧∈螅ㄟ^注射特定抗原使動物產(chǎn)生免疫反應(yīng),從而在體內(nèi)形成能夠識別該抗原的B淋巴細(xì)胞。
2. 融合細(xì)胞:將上述免疫后的脾臟中提取出的B淋巴細(xì)胞與一種可以無限增殖但自身不能分泌抗體的骨髓瘤細(xì)胞進(jìn)行融合。通常使用聚乙二醇(PEG)作為促融劑來促進(jìn)兩種細(xì)胞之間的融合過程,形成雜交瘤細(xì)胞。
3. 篩選克?。簩⑷诤虾蟮幕旌霞?xì)胞接種到選擇性培養(yǎng)基中,只有成功融合形成的雜交瘤細(xì)胞才能生存并增殖。通過有限稀釋法或其他方法篩選出能夠穩(wěn)定分泌所需單克隆抗體的單一細(xì)胞系(即克?。?br/>4. 擴增與純化:對篩選出來的陽性克隆進(jìn)行擴增,并采用適當(dāng)?shù)姆椒◤呐囵B(yǎng)上清或小鼠腹水中提取和純化目標(biāo)單抗。
5. 鑒定與應(yīng)用:最后,需要對抗體的特異性、親和力等性質(zhì)進(jìn)行全面鑒定,確保其符合預(yù)期要求后方可用于科研或臨床檢測等領(lǐng)域。
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