分子生物學(xué)分型法有哪些?
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(一)RFLP與PCR-RFLP分型法
限制性片段長(zhǎng)度多態(tài)性(RFLP)分析,稱為DNA-RFLP。
DNA片段進(jìn)行體外擴(kuò)增,然后再用限制性內(nèi)切酶進(jìn)行酶切分析,可使限制性長(zhǎng)度分析的敏感度增加,此類方法稱為PCR-RFLP分型法。PCR-RFLP分型法所應(yīng)用的PCR引物為HLA組特異性的,此法特別適應(yīng)于小量標(biāo)本的研究和異基因骨髓移植供者的選擇。
(二)PCR-SSO分型法
是PCR與雜交相結(jié)合的技術(shù),從而對(duì)擴(kuò)增產(chǎn)物作出HLA型別判斷。
PCR-SSO是Ⅱ類HLA分型應(yīng)用最廣泛的方法,能鑒定所有已知序列的HLA-DR、HLA-DQ、HLA-DP等位基因。
基因芯片是與PCR-SSO結(jié)合應(yīng)用于HLA分型,可使分型趨于規(guī)?;妥詣?dòng)化,尤其在HLA多態(tài)性和疾病遺傳背景分析等方面更具優(yōu)勢(shì)。
(三)PCR/SSP分型法
應(yīng)用HLA等位基因的序列特異性引物(SSP),對(duì)待測(cè)DNA進(jìn)行PCR擴(kuò)增,從而獲得HLA型別特異性的擴(kuò)增產(chǎn)物。
(四)PCR-SSCP分型法
單鏈構(gòu)象特異性-聚合酶鏈反應(yīng)(PCR-SSCP),是以待測(cè)基因PCR擴(kuò)增為基礎(chǔ),對(duì)擴(kuò)增的DNA單鏈(ssDNA)的HLA分型方法。
(五)SBT分型法
基于序列的HLA分型法(SBT),可通過(guò)對(duì)擴(kuò)增后的HLA基因片段進(jìn)行的核酸序列測(cè)定判斷HLA型別。
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