噬菌體抗體庫技術(shù)的基本原理和程序是什么?
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將體外克隆的抗體基因片段插入噬菌體載體,轉(zhuǎn)染工程細菌進行表達,然后用抗原篩選即可獲得特異的單克隆噬菌體抗體。
利用這一技術(shù)可以得到完全人源性的抗體,在HIV等病毒感染和腫瘤的診斷與治療方面有其獨特的優(yōu)越性。
基本原理和程序:
構(gòu)建噬菌體抗體庫通常包括以下幾個過程:
1.從外周血或脾、淋巴結(jié)等組織中分離B淋巴細胞,提取mRNA并反轉(zhuǎn)錄為cDNA;
2.應(yīng)用抗體輕鏈和重鏈引物,根據(jù)建庫的需要通過PCR技術(shù)擴增不同的Ig基因片段;
3.構(gòu)建噬菌體載體;
4.表達載體轉(zhuǎn)化細菌,構(gòu)建全套抗體庫。
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