酶活性測定的常見方法都有哪些?
酶活性測定的常見方法都有哪些?為了幫助檢驗職稱考生了解,醫(yī)學教育網(wǎng)為大家整理如下:
(1)定時法:(兩點法)
通過測定酶反應開始后某一時間段內(nèi)(t1到t2)產(chǎn)物或底物濃度的總變化量來求取酶反應初速度的方法。其中t1往往取反應開始的時間。
酶與底物在一定溫度下作用一段固定的時間,通過加入強酸、強堿、蛋白醫(yī)學教育網(wǎng)整理沉淀劑等,使反應完全停止(也叫中止反應法)。加入試劑進入化學反應呈色測出底物和產(chǎn)物的變化。
該法最基本的一點是停止反應后才測定底物或物的變化。
優(yōu)點:簡單易行,對試劑要求不高。
缺點:難保證測定結(jié)果的真實性。
難以確定反應時間段酶促反應是否處于線性期。隨著保溫時間的延續(xù),酶變性失活加速。
(2)連續(xù)監(jiān)測法:
又稱為動力學法或速率法、連續(xù)反應法。
在酶反應過程中,用儀器監(jiān)測某一反應產(chǎn)物或底物濃度隨時間的變化所發(fā)生的改變,通過計算求出酶反應初速度。
連續(xù)監(jiān)測法根據(jù)連續(xù)測得的數(shù)據(jù),可選擇線性期的底物或產(chǎn)物變化速率用于計算酶活力。
因此連續(xù)監(jiān)測法測定酶活性比定時法更準確。
實際工作中,采用工具酶的酶偶聯(lián)法已經(jīng)成為醫(yī)學教育網(wǎng)整理應用最廣、最頻繁測酶活性濃度的方法。
(3)平衡法:
通過測定酶反應開始至反應達到平衡時產(chǎn)物或底物濃度總變化量來求出酶活力的方法,又叫終點法。
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