
ELISA檢測(cè)原理是什么?
ELISA,即酶聯(lián)免疫吸附試驗(yàn)(Enzyme-Linked Immunosorbent Assay),是一種廣泛應(yīng)用于臨床檢驗(yàn)和科研中的生物化學(xué)技術(shù)。其基本原理是利用抗原與抗體之間的特異性結(jié)合反應(yīng),并通過酶催化底物顯色來定性或定量地檢測(cè)目標(biāo)物質(zhì)。
ELISA主要分為直接法、間接法、夾心法(雙抗體夾心法)和競(jìng)爭(zhēng)法四種類型:
1. 直接法:將待測(cè)抗原固定在固相載體上,加入針對(duì)該抗原的酶標(biāo)抗體,經(jīng)過洗滌去除未結(jié)合部分后,再加底物顯色。此方法簡(jiǎn)單快速但靈敏度較低。
2. 間接法:先讓待測(cè)樣本中的特異性抗體與包被于反應(yīng)板上的已知抗原相結(jié)合,然后用酶標(biāo)記的二抗識(shí)別并結(jié)合這些一抗,最后通過加入底物使顏色變化來判斷結(jié)果。這種方式提高了檢測(cè)敏感性和靈活性。
3. 夾心法(雙抗體夾心法):適用于測(cè)定含有兩個(gè)以上相同或不同表位的大分子抗原。首先將一種特異性抗體固定在固相載體上作為捕獲抗體,待測(cè)樣本中的目標(biāo)抗原與之結(jié)合形成復(fù)合物;隨后加入另一種特異性的酶標(biāo)記抗體,即檢測(cè)抗體,它能識(shí)別并結(jié)合到已經(jīng)形成的免疫復(fù)合物上的另一表位,最終通過底物顯色來確定目標(biāo)抗原的存在及其濃度。
4. 競(jìng)爭(zhēng)法:當(dāng)待測(cè)物質(zhì)為小分子或多肽時(shí)常用此方法。原理是將已知量的酶標(biāo)抗原與未知量的非標(biāo)記抗原競(jìng)爭(zhēng)性地結(jié)合到有限數(shù)量的抗體位點(diǎn)上,通過比較兩者之間的差異來推算出樣品中目標(biāo)物的含量。
ELISA技術(shù)因其操作簡(jiǎn)便、特異性強(qiáng)、靈敏度高和適用范圍廣等特點(diǎn),在臨床診斷領(lǐng)域得到了廣泛應(yīng)用。
ELISA主要分為直接法、間接法、夾心法(雙抗體夾心法)和競(jìng)爭(zhēng)法四種類型:
1. 直接法:將待測(cè)抗原固定在固相載體上,加入針對(duì)該抗原的酶標(biāo)抗體,經(jīng)過洗滌去除未結(jié)合部分后,再加底物顯色。此方法簡(jiǎn)單快速但靈敏度較低。
2. 間接法:先讓待測(cè)樣本中的特異性抗體與包被于反應(yīng)板上的已知抗原相結(jié)合,然后用酶標(biāo)記的二抗識(shí)別并結(jié)合這些一抗,最后通過加入底物使顏色變化來判斷結(jié)果。這種方式提高了檢測(cè)敏感性和靈活性。
3. 夾心法(雙抗體夾心法):適用于測(cè)定含有兩個(gè)以上相同或不同表位的大分子抗原。首先將一種特異性抗體固定在固相載體上作為捕獲抗體,待測(cè)樣本中的目標(biāo)抗原與之結(jié)合形成復(fù)合物;隨后加入另一種特異性的酶標(biāo)記抗體,即檢測(cè)抗體,它能識(shí)別并結(jié)合到已經(jīng)形成的免疫復(fù)合物上的另一表位,最終通過底物顯色來確定目標(biāo)抗原的存在及其濃度。
4. 競(jìng)爭(zhēng)法:當(dāng)待測(cè)物質(zhì)為小分子或多肽時(shí)常用此方法。原理是將已知量的酶標(biāo)抗原與未知量的非標(biāo)記抗原競(jìng)爭(zhēng)性地結(jié)合到有限數(shù)量的抗體位點(diǎn)上,通過比較兩者之間的差異來推算出樣品中目標(biāo)物的含量。
ELISA技術(shù)因其操作簡(jiǎn)便、特異性強(qiáng)、靈敏度高和適用范圍廣等特點(diǎn),在臨床診斷領(lǐng)域得到了廣泛應(yīng)用。
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