一、基本原理

紫外——可見(jiàn)分光光度法：是根據(jù)物質(zhì)分子對(duì)波長(zhǎng)為200-760nm這一范圍的電磁波的吸收特性所建立起來(lái)的一種定性、定量和結(jié)構(gòu)分析方法。操作簡(jiǎn)單、準(zhǔn)確度高、重現(xiàn)性好。

波長(zhǎng)長(zhǎng)（頻率小）的光線能量小，波長(zhǎng)短（頻率大）的光線能量大。

100nm 200nm 400nm 800nm 400um 1m

通指

X-射線 紫外區(qū) 可見(jiàn)區(qū) 紅外區(qū) 微波區(qū) 無(wú)線電波區(qū)

Beer-lambert定律： A=E l c A——吸收度 E-吸收系數(shù) l ——液層厚度 c——溶液濃度

吸收度濃度與厚度的關(guān)系。是吸收光度法的基本定律，重要前提是單色光。

摩爾吸收系數(shù)：指在一定波長(zhǎng)下，溶液濃度為1mol/L ， 厚度為1cm時(shí)的吸收度，用 表示。

百分吸收系數(shù)：指在一定波長(zhǎng)下，溶液濃度為1%（W/V） ， 厚度為1cm時(shí)的吸收度，用 表示。

影響B(tài)eer定律因素：化學(xué)因素，光學(xué)因素

二、紫外——可見(jiàn)分光光度計(jì)： 主要部件：醫(yī)學(xué)教育;網(wǎng) //348239.com

1、光源：要求光譜的光源，氫燈和鎢燈（350nm）

2、單色器：進(jìn)口狹縫、準(zhǔn)直鏡、色散元件（棱鏡和光柵）、聚焦透鏡和出口狹縫組成。

3、吸收池：用光學(xué)玻璃制成的吸收池，只能用于可見(jiàn)光區(qū)。用熔融石英（氧化硅），可見(jiàn)紫外光區(qū)。

4、檢測(cè)器：光電池：（硒光電池：用于可見(jiàn)光；硅光電池：紫外可見(jiàn)光） 內(nèi)阻小，易疲勞。

光電管：內(nèi)阻高，電流易放大 .

5、訊號(hào)處理和顯示器

三、定性與定量方法：醫(yī)學(xué)教l育網(wǎng) //348239.com

（一）、定性鑒別：是多數(shù)有機(jī)化合物具有吸收光譜特征。一般用對(duì)比法。

1、對(duì)比吸收光譜特征數(shù)據(jù)

2、對(duì)比吸收度（或吸收系數(shù)）比值

3、對(duì)比吸收光譜的一致性

（二）、純度檢查：雜質(zhì)檢查與雜質(zhì)限量檢測(cè)

（三）、含量測(cè)定：

1、吸收系數(shù)法

2、標(biāo)準(zhǔn)曲線法

3、對(duì)照法

第二節(jié) 熒光分析法

熒光分析法：利用熒光的物理特性而進(jìn)行定性與定量測(cè)定的方法。醫(yī)學(xué)教育網(wǎng)　收集整理熒光法比紫外可見(jiàn)靈敏。

熒光光度計(jì)：激發(fā)光源、樣品池、檢測(cè)器、濾光片和單色器。

第三節(jié) 紅外分光光度計(jì)

紅外線：波長(zhǎng)大于0.76um，小于500um的電磁波。 Hooke定律來(lái)描述分子的伸縮振動(dòng)。

當(dāng)分子的振動(dòng)頻率與入射的紅外頻率相同時(shí)，分子對(duì)紅外產(chǎn)生吸收。伸縮振動(dòng)和彎曲振動(dòng)。

基頻峰：分子吸收一定頻率的紅外線，振動(dòng)能級(jí)由基態(tài)（V=0）躍遷至第一激發(fā)態(tài)時(shí)產(chǎn)生的吸收峰。

倍頻峰：振動(dòng)能級(jí)由基態(tài)躍至第二、三激發(fā)態(tài)。統(tǒng)稱泛頻峰。

吸收峰：用于鑒別官能團(tuán)存在的吸收峰稱特征吸收峰。

指紋區(qū)：1250-400cm （8.0-25um）的低頻區(qū)稱為指紋區(qū)。醫(yī)學(xué)教w育網(wǎng) //348239.com

紅外分光光度計(jì)主要部件：光源、吸收池、單色器（棱鏡和光柵）和檢測(cè)器（真空熱電偶）及記錄裝置。